操作步骤
一  实验前期准备
1   体系筛选(见附件1)
2   体系确定后,体系的配制.
注意事项:
A  体系中各组分试剂配比务必精确
B  体系配制好后,给其足够的分层时间让其分相.(最好让其过夜,使其充分分相)
C  将分相后的上下相溶剂超声排除气泡.(时间大约半小时)
二  具体实验操作步骤
1   打开高速逆流色谱仪、恒流泵电源.
2   开启循环水浴.
3   开启检测器电源让其预热.
4   同时以一定的流速泵入上相(固定相),根据不同试剂的黏度控制泵入上相的流速,一般情况该流速控制在25ml/min以下.
5   待发现出液端有上相流出,暂停恒流泵,将其流速调整至工作流速后,再将输液端放置到下相(流动相)中.待用.
6   将高速逆流色谱仪调整到工作转速(一般情况下工作转速是850rpm,根据分离物质的不同情况,可以适当的提高或减小转速,不建议使用过高转速),开启高速逆流色谱仪,待运转平稳后开启恒流泵泵入下相,等待平衡.流出溶剂用合适的量筒接收,为以后计算保留率做准备.
7   当发现量筒中有下相(流动相)流出后,即证明体系平衡.此时计算保留率,准备进样.
8   将准备好的样品倒入针桶,将六通阀从INJECT档旋转到LOAD档,用注射器将样品吸入进样圈后再将六通阀旋转回INJECT档,此时进样完毕.
9   将预热后的检测器实施样品采集,同时开启色谱工作站进行数据采集.
10  准备干净的收集瓶,根据色谱工作站的数据显示收集样品.
三  实验结束操作
1   结束色谱工作站的数据采集
2   关高速逆流色谱仪
3   停恒流泵
4   清洗设备
5   关循环水浴
6   将清洗后的设备吹干