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外源基因的诱导与表达 pET32a载体
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求助大神: 最近在进行一个关于酶基因的筛选工作,从原菌株里面克隆了几个基因片段连接到载体pET32a,转化宿主 ormDE3,尝试了好多种表达条件,各种条件表达跑SDS-PAGE均有明显目的条带,但我需要拿含有我的表达基因的细胞去转化我的糖底物看有没有目的产物产生,但是一直都没有任何反应,老板觉得肯定是哪里有问题,让我采用各种反应体系做了几个月了,还是没有任何反应,本人实在是实验小白,没接触过蛋白,实验室大家也不懂,大家有任何见解都可以给我说说呗,可怜脸....... |
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最近在进行一个关于酶基因的筛选工作,从原菌株里面克隆了几个基因片段连接到载体pET32a,转化宿主 ormDE3,尝试了好多种表达条件,各种条件表达跑SDS-PAGE均有明显目的条带,但我需要拿含有我的表达基因的细胞去转化我的糖底物看有没有目的产物产生,但是一直都没有任何反应,老板觉得肯定是哪里有问题,让我采用各种反应体系做了几个月了,还是没有任何反应,本人实在是实验小白,没接触过蛋白,实验室大家也不懂,大家有任何见解都可以给我说说呗,可怜脸.......
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