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snhajn

新虫 (著名写手)

[求助] T载体连接 已有3人参与

我的目的基因924bp,连接到T载体后,转到大肠杆菌感受态中,提质粒,可是大小在1500-2000bp那里,实际上不是应该在3616bp吗?做何解?注:18T为2692bp

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snhajn

新虫 (著名写手)

2楼2016-11-01 17:49:07
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wugenpeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by snhajn at 2016-11-01 17:49:07
Marker用的2000bpDNA Marker,

质粒是环状的,跑出来的条带不能用MARKER衡量大小。只要看条带浓度挺好就行。
3楼2016-11-02 11:17:38
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶切或测序验证,这样子是比较好的

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4楼2016-11-02 11:39:30
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243009076

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你先挑单克隆挑出阳性的克隆子,然后提质粒再做PCR,看能不能得到你的目的片段,检查连接是否正确
5楼2016-11-02 15:24:26
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snhajn

新虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 243009076 at 2016-11-02 15:24:26
你先挑单克隆挑出阳性的克隆子,然后提质粒再做PCR,看能不能得到你的目的片段,检查连接是否正确

用我p目的基因的引物做pcr就可以吗?不用在目的基因上选一段设计引物,t载体上再选一段吗,再p吗

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6楼2016-11-03 12:14:54
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243009076

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你先用目的片段的引物试一下,至少保证这个可以p的出来,然后再用载体引物去p,确保它是连接正确的

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7楼2016-11-03 12:46:27
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star013

新虫 (知名作家)


8楼2016-11-03 12:55:05
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