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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 求助！！蛋白电泳条带定量！！！
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
我们都是把菌密度调节到2.0，然后处理样品，其实全菌体样品，电泳测定不准，如果有钱那就elisa

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十四_14
I am not a hero , but I served with heroes！
11楼2016-11-02 17:25:56
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)
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11楼: Originally posted by wlt728 at 2016-11-02 17:25:56
我们都是把菌密度调节到2.0，然后处理样品，其实全菌体样品，电泳测定不准，如果有钱那就elisa

你的意思是调节菌液的OD值吗？那么调节后取样多少来制备电泳样品呢？
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12楼2016-11-04 10:52:23
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
最终体积是1ml，离心进行样品处理！

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I am not a hero , but I served with heroes！
13楼2016-11-04 14:46:49
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by wlt728 at 2016-11-04 14:46:49
最终体积是1ml，离心进行样品处理！

是调2.0后，取1mL样品  离心  然后加loading buffer溶解沉淀呗？

那你的loading buffer加了多少？
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14楼2016-11-09 17:02:43
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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十四_14: 金币+100, ★★★很有帮助 2016-11-10 17:07:15
你对你的目的蛋白要是性质了解的话，建议做一些纯化之后，纯度提高之后，在考虑定量。然后在反推你的蛋白在其中的比例，也比你现在这样定个总量有意义的多。毕竟你想要的不是全菌所有蛋白，只关心目的蛋白的量而已！
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15楼2016-11-10 12:33:23
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2016-11-10 12:33:23
你对你的目的蛋白要是性质了解的话，建议做一些纯化之后，纯度提高之后，在考虑定量。然后在反推你的蛋白在其中的比例，也比你现在这样定个总量有意义的多。毕竟你想要的不是全菌所有蛋白，只关心目的蛋白的量而已！

恩  我也觉得全菌定量不准  无奈领导要定量  我也是很无语
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16楼2016-11-10 17:08:14
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