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月夜鸣鸣

铜虫 (初入文坛)

[求助] PEG8000包埋浓缩蛋白,里面的尿素会不会随水一起出来??急急急

本人表达重组蛋白,量很小,而且是包涵体形式,8M尿素变性溶解,镍柱纯化后,经反复优化复性方法,均没有达到预期效果,一进PBS透析就出大量沉淀,而上清蛋白含量寥寥无几,所以转而想做含2M尿素蛋白,透析至2M时PEG8000浓缩,现在担心浓缩过程中尿素也会浓度升高,请问尿素会随水分子一起析出来吗?透析袋中蛋白还能保持在2M吗?因为太大量的尿素可能对后续实验有影响。。。先感谢各位帮忙!!!@biostar2009
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AIfever

木虫 (正式写手)

我最近也想用PEG8000浓缩,请问楼主PEG8000吸水能力大概有多强,吸水后能除水重复使用吗
2楼2016-10-31 11:18:52
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月夜鸣鸣

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by AIfever at 2016-10-31 11:18:52
我最近也想用PEG8000浓缩,请问楼主PEG8000吸水能力大概有多强,吸水后能除水重复使用吗

可以的,我一般把袋子扎的会紧一点,PEG压碎一点,包埋后,会轻轻揉一揉,吸水能力还挺强的
3楼2016-10-31 11:25:50
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天际雾影

新虫 (小有名气)

兄弟,我也遇到一透析到PBS就沉淀的情况
你加UREA后纯化成功了么
4楼2016-11-21 19:53:17
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月夜鸣鸣

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 天际雾影 at 2016-11-21 19:53:17
兄弟,我也遇到一透析到PBS就沉淀的情况
你加UREA后纯化成功了么

我用镍柱在变性条件下纯化的,因为表达蛋白带有His标签,纯化效果还可以!

发自小木虫Android客户端
5楼2016-11-23 00:40:35
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匿名

用户注销 (小有名气)

本帖仅楼主可见
6楼2020-02-14 08:12:47
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