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凌波水帘

铁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
钱塘幼麟: 金币+2, 细心回复! 2016-11-02 13:36:38
钱塘幼麟: 金币+1, 谢谢! 2016-11-03 11:58:07
我PCR完后跑胶回收,回收体积不要大,而且,目的片段:载体10:1说的是摩尔数之比,不是体积!除非这两货浓度一样……如果你引物酶切位点加对了的,那考虑提高片段浓度,载体酶切过夜,没看前贴,你可确定是两个酶都切开了,要是还连不上,pcr产物测个序看p的对不对啊

发自小木虫Android客户端
21楼2016-11-02 01:48:35
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国产武器

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 钱塘幼麟 at 2016-10-29 15:10:39
你好!
目的片段是PCR扩增产物。在PCR中,设计的引物将酶切位点引入该片段的两端。请问这样容易酶切吗?...

有保护碱基还是很容易的,省去连T的时间

发自小木虫Android客户端
22楼2016-11-02 08:10:26
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可爱范儿二

铜虫 (小有名气)

乙醇没吹干净?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
23楼2016-11-02 09:16:47
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hjyxm

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
钱塘幼麟: 金币+3, 谢谢! 2016-11-02 13:35:52
钱塘幼麟: 金币+1, 谢谢! 2016-11-03 11:57:55
最好是设计引物的时候在5·端加入限制性内切酶的碱基,然后连接到T载体上,测序后,再酶切连接,效果更好!
好好工作!
24楼2016-11-02 11:23:57
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钱塘幼麟

木虫 (著名写手)

引用回帖:
24楼: Originally posted by hjyxm at 2016-11-02 11:23:57
最好是设计引物的时候在5·端加入限制性内切酶的碱基,然后连接到T载体上,测序后,再酶切连接,效果更好!

你好!
能不能麻烦说一下具体操作细节或者给个protocol!谢谢!
25楼2016-11-02 13:35:42
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zhaoxik

金虫 (正式写手)

Dr.


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
目标片段数量是否合理?
黄沙百战穿金甲,不破楼兰终不还。
26楼2016-11-02 16:44:45
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hattie919822

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 钱塘幼麟 at 2016-10-29 15:11:51
你好!
目的片段:载体=10微升:1微升。请问是否合理?...

可以适当再提高一些比例
不见不知不伴不惜不
27楼2016-11-18 17:06:42
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