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钱塘幼麟

木虫 (著名写手)

[交流] 载体质粒已经被限制酶切开,为什么目的片段还是插不进去?请问有哪些原因和应对策略。 已有1人参与

如前帖:

在使用相应的限制酶去切载体质粒,琼脂糖凝胶电泳图的条带显示已经被切开。目的片段两端也被处理过,露出对应的黏性末端。目的片段约300bp,载体质粒约4000bp。为什么还是插不进质粒?请问有什么原因以及应对策略?非常感谢!
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
把目的片段的比例提高一下,多加点
···
4楼2016-10-29 09:06:01
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查看全部 27 个回答

kaobo2012

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
钱塘幼麟: 金币+3, 谢谢! 2016-10-29 15:10:51
目的片段是PCR产物酶切吗?这样有些酶切效果不是很好。可能酶切不了。你可以先连接到T载体上,再酶切目的片段,这样可以保证是酶切完全的。
3楼2016-10-28 22:46:43
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Rosetta

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
会不会连接时间不够

发自小木虫Android客户端
5楼2016-10-29 10:20:47
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钱塘幼麟

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Rosetta at 2016-10-29 10:20:47
会不会连接时间不够

你好!反应时间都是足够的。

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-10-29 11:27:47
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