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双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)

[求助] 崩溃!商品油的DNA,我们是否有缘相见…… 已有2人参与

使用了各种方法后,我真的无能为力了,买了个油类提取试剂盒也没有把DNA提出来,我要崩溃了……我需要做过同样的试验的人的帮助……

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huay13

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我就在做油基因提取,试剂盒提取没有用的,必须用手抽。
食品是个坑
2楼2016-11-07 11:41:39
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huay13

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以参考,茶籽油 DNA 提取方法的比较,核酸提取就是裂解和纯化,裂解我尝试了sds貌似比catb好点吧,可能除蛋白更完全,油里面基因组全部断裂了,无所谓剧烈不剧烈了。用PCI抽,我是直接把水相和沉淀一起抽,重复4次吧,完全澄清水相,后续就是沉淀了,乙醇沉淀或者过柱子,过柱子推荐用qiagen的removal试剂盒,可以最小过45bp的片段,我跑过食用油的DNA片段,基本都是50bp,所以thermoFisher,天跟,axygen的柱子就不推荐使用,损失太大。乙醇沉淀得率会高,纯度就看手法了。大致思路就这样了,提取方法都是差不多了,细节很关键。
食品是个坑
3楼2016-11-07 13:21:26
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sungel

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

sds貌似比catb好点?不太可能,可以加点PVP试试吧,CTAB理论上会更温和
4楼2016-11-07 17:28:39
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双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by huay13 at 2016-11-07 13:21:26
可以参考,茶籽油 DNA 提取方法的比较,核酸提取就是裂解和纯化,裂解我尝试了sds貌似比catb好点吧,可能除蛋白更完全,油里面基因组全部断裂了,无所谓剧烈不剧烈了。用PCI抽,我是直接把水相和沉淀一起抽,重复4次 ...

嗯,谢谢,不过可以不过柱子吗?

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5楼2016-11-08 11:36:17
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双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sungel at 2016-11-07 17:28:39
sds貌似比catb好点?不太可能,可以加点PVP试试吧,CTAB理论上会更温和

PVP不是防氧化的吗?

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6楼2016-11-08 11:36:56
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

建议,提多管,合并后,再浓缩

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7楼2016-11-08 14:02:19
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双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by choujiaoqi at 2016-11-08 14:02:19
建议,提多管,合并后,再浓缩

我想过浓缩,但是最好的方法就是旋转冻干,因为片段太小了容易飘出……所以现在就想怎么富集

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8楼2016-11-08 16:22:52
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

可以试试,醋酸盐浓缩。

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9楼2016-11-08 16:28:00
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双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by choujiaoqi at 2016-11-08 16:28:00
可以试试,醋酸盐浓缩。

有依据吗?为什么用醋酸盐呢

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10楼2016-11-09 09:23:19
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