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定磷法检测磷脂浓度?
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有无人做过定磷法检测磷脂浓度的?问题请教,本人新手 步骤: 钼酸铵溶液:取220mg溶于75ml纯水中,缓慢加入200ul浓硫酸,定容至100ml。 Fiske-Subbarow溶液:取亚硫酸氢钠15g、亚硫酸钠0.5g,溶于100ml纯水中,加入1-氨基-2-萘酚-4-磺酸0.25g,在通风橱中40℃水浴避光电磁搅拌1.0-2.0h。室温下,避光静置过夜,滤除不溶物,储存于棕色试剂瓶中备用。 磷标准液(1mmol/L):精确秤取无水磷酸氢二钠14.2mg,溶于纯水,定容至100ml。 样品制备:待测样本或标准品100ul,加入0.5ml 5M H2SO4 消化至无机磷酸盐 180℃孵育2-3小时。100ul 30% H2O2 烤箱1.5h孵育。 加入4.6ml 0.22%钼酸铵和0.2ml的Fiske-Subbarow溶液 沸水浴中7min,冰水浴中快速冷却,830nm吸光度测定吸光度。 绘制标准曲线,测定待测样本浓度 这个过程对不?步骤中有什么需要注意的部分?尤其是180℃加入步骤,实验室没有电炉或者消化炉等,油浴可以吗?还有硫酸加热中,看在通风厨中进行,消化步骤中有危险不? 做过的人给指点下 |
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