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孔庙祈福

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[交流] 关于EDC/NHS活化羧基，连接氨基问题已有2人参与

请问各位，在EDC和NHS活化羧基过程中的具体条件是什么？有人说是pH=4-6，是活化羧基时的ph还是加氨基之后调ph？活化需要多久？温度，酸碱度，时间又是怎么样的？同样的，连接氨基又需要多久，条件如何？小弟刚做这个，两眼一抹黑，求大神指点！

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1楼 2016-10-25 16:06:05

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彭彭LL

新虫 (初入文坛)

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先活化羧基，活化的时候要用MES缓冲液，一般要求PH调到6左右，或者还有5.5的，具体看偶联物质的说明书。活化一般30min37℃。NHS和EDC的浓度为5mg/ml，1:1.有的操作和文献里浓度和比例略有差别。与氨基偶联的时候还是使用MES缓冲液，37摄氏度偶联3小时以上（也有室温12h的，具体看氨基物质），偶联完毕后调回PH7.5。这个我做过，效果还不错。
也有步骤说活化后先调节PH，再偶联的。

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2楼2016-10-25 16:19:58

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孔庙祈福

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 彭彭LL at 2016-10-25 16:19:58
先活化羧基，活化的时候要用MES缓冲液，一般要求PH调到6左右，或者还有5.5的，具体看偶联物质的说明书。活化一般30min37℃。NHS和EDC的浓度为5mg/ml，1:1.有的操作和文献里浓度和比例略有差别。与氨基偶联的时候还是 ...

大神，MES配方有么

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3楼2016-10-25 16:52:51

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