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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 高效液相色谱基础问题和液质联用基础问题
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赵文华110

银虫 (正式写手)

[求助] 高效液相色谱基础问题和液质联用基础问题 已有2人参与

液相
1、在使用高效液相色谱时，什么时候用梯度方法，什么时候用等梯度方法？
2、HPLC都有那些检测器可以用，是根据什么原理来选择的呢？
3、液相色谱为什么要使用缓冲溶液，缓冲溶液中用很多需要加入少量的有机相的目的是什么，缓冲溶液的pH是如何选择的，对于同一个样品如果pH不同，对检测结果有什么样的影响呢？
4、HPLC相对应的软件有几个，分别是什么？
5、HPLC的进样量为5~100ul，那么进3ul会有什么影响，进样量太大会有什么影响呢？
6、为什么要用甲醇冲柱子，换成乙腈可以吗，如果不行，原因是？
7、为什么要用10：90的甲醇水冲洗柱子，换个比例可以吗，如果不行是因为什么呢？
LC-MS
1、MS的流动相不用盐溶液的原因是什么，（MS会将样品离子化，出来的结果是相对应各个离子的，如果加入盐，电离产生的离子，会一起出结果，会影响检测结果）除了这个原因还有其他影响吗？
2、MS除了可以进行离子化检测，还能检测什么呢，比如，在生物当中的应用，也是要看的正负离子的检测结果吗？
3、MS当中的那个部件是负责将样品离子化的，是如何进行的？
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我相信我就是我，我相信明天，我相信青春没有地平线
1楼 2016-10-24 12:29:33
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远与近

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
赵文华110(费姚永芬代发): 金币+20, 谢谢交流 2016-12-01 12:57:01
引用回帖:
4楼: Originally posted by 赵文华110 at 2016-10-24 15:29:42
谢谢，回答有些笼统，可以举例说明吗？
1、在什么情况下选择用梯度分离，什么情况下选择等梯度分离，根据的原理是什么？
2、问题5的答案，不具有说服力，当我进5ul出现平头的情况时，那么，我会选择进3ul，但这样 ...

给你发点资料，慢慢看
一个内容有点大，发个链接给你。
链接：http://pan.baidu.com/s/1qXUPZbe 密码：p3wd
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5楼2016-10-24 15:50:48
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赵文华110

银虫 (正式写手)
因为刚开始接触，问题都比较基础，也可以推荐相关的书籍，我自己找答案。问题比较多，希望大家可以相互交流，祝愿各位虫友前途似锦。
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我相信我就是我，我相信明天，我相信青春没有地平线
2楼2016-10-24 12:35:03
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远与近

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西湖醉鱼: 金币+10, 感谢分享 2016-10-24 14:39:04
1、在使用高效液相色谱时，什么时候用梯度方法，什么时候用等梯度方法？这个是根据方法或者样品出峰时间长短以及分离效果等决定的。
5、HPLC的进样量为5~100ul，那么进3ul会有什么影响，进样量太大会有什么影响呢？进样量太小响应值太低不精确，太大出峰会拖尾或者柱子有残留（因情况不同）
6、为什么要用甲醇冲柱子，换成乙腈可以吗，如果不行，原因是？7、为什么要用10：90的甲醇水冲洗柱子，换个比例可以吗，如果不行是因为什么呢？这两个问题可以是一个问题，一般冲柱子大都是10%左右的甲醇或者乙腈，有的也可能浓度变高主要是对于缓冲盐来说的（怕柱子里边有缓冲盐析出）。至于流动相冲洗的选择也是以缓冲盐开说的，缓冲盐用10%甲醇然后用甲醇封柱子，其他的可以用10%乙腈或者乙腈来冲洗。
3、液相色谱为什么要使用缓冲溶液，缓冲溶液中用很多需要加入少量的有机相的目的是什么，缓冲溶液的pH是如何选择的，对于同一个样品如果pH不同，对检测结果有什么样的影响呢？因为缓冲液对PH值的变化具有较大的缓冲作用，故常用缓冲液控制流动相的pH值，其存在改变了化合物的解离程度，进而影响其与固定相的作用，调节其分配系数，此时流动相的缓冲盐浓度大，不利于样品的解离，使样品较快流出，因此会改善峰形，减小峰宽，抑制拖尾，塔板数自然提高。
－采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和 30mmol/L三乙胺溶液。
注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。
4、HPLC相对应的软件有几个，分别是什么？这个看你们当前用的是什么系统了。
2、HPLC都有那些检测器可以用，是根据什么原理来选择的呢？（见附件）
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  • 附件 1 : HPLC检测器大全.doc
    • 2016-10-24 13:57:26, 29.5 K
3楼2016-10-24 13:57:27
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赵文华110

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 远与近 at 2016-10-24 13:57:27
1、在使用高效液相色谱时，什么时候用梯度方法，什么时候用等梯度方法？这个是根据方法或者样品出峰时间长短以及分离效果等决定的。
5、HPLC的进样量为5~100ul，那么进3ul会有什么影响，进样量太大会有什么影响呢？ ...

谢谢，回答有些笼统，可以举例说明吗？
1、在什么情况下选择用梯度分离，什么情况下选择等梯度分离，根据的原理是什么？
2、问题5的答案，不具有说服力，当我进5ul出现平头的情况时，那么，我会选择进3ul，但这样是不允许的（药品检测过程中），正确的做法是稀释样品，再进样。
3、那么冲柱子时为什么不直接用纯水呢，或者用乙腈水溶液，例如，我做的检测，流动相用乙酸胺，5%的乙腈配制，那么我在冲柱子时，会不会用乙腈水溶液更好呢，但这不被允许。
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我相信我就是我，我相信明天，我相信青春没有地平线
4楼2016-10-24 15:29:42
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