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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 为什么T载体总是连不上啊
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一起来旅行

银虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-24 19:05:04
应该是载体自连了吧，重新做吧，而且pcr产物回收浓度太低了

有避免自连的方法吗？！求助，已经试过很多次了

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11楼2016-10-24 19:17:22
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wyhwjm100

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌P不出来可能是所用的PCRmix不适合样品，建议更换另一个品牌的PCRmix试一下，可以的话直接先挑2个样品测个序看一下
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12楼2016-10-24 19:17:27
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-24 22:34:05
引用回帖:
11楼: Originally posted by 一起来旅行 at 2016-10-24 19:17:22
有避免自连的方法吗？！求助，已经试过很多次了
...

有可能你买来的T载体就不行，之前我们也是，经常自练，后来换一批就好了，你可以考虑，还有就是你pcr产物加A之后回收了吗？
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···
13楼2016-10-24 19:19:23
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firefly22

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
14楼2016-10-24 19:37:19
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chen5805

至尊木虫 (职业作家)

资深木虫
我一般按照solution 5ul，T载体0.5ul,目的基因4.5ul，每次都成功

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15楼2016-10-24 19:47:39
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flyazheng

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-24 22:34:37
首先片段载体浓度要够
然后看说明书配体系和操作
最后转入保证么有问题的感受态（做个阳新对照）
实在连不上：换载体
另：有一次我也死活连不上，据说2k片段不好连。后来直接连了终载体
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16楼2016-10-24 20:10:02
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生物技术专业

铁虫 (小有名气)
加油呀
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17楼2016-10-24 21:25:43
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damaoouba

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶回收浓度好像太低了吧。。PCR产物稀释一下做模板重新P然后跑胶回收试试。
菌斑能长的话考虑是不是载体自连了。
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18楼2016-10-25 13:55:28
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吗子

金虫 (小有名气)
T加0.5试试

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深秋
19楼2016-10-25 15:05:07
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15800717692

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你挑些蓝斑测序  片段小于300或者大于3000时可能不能激活lacz  蓝斑也会有目的片段   且上次师姐一直挑白斑都显示未连上   她挑蓝斑测序却显示连上去了

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20楼2016-10-25 23:39:55
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