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配置75%酒精纯化的原理和作用是什么？ 已有1人参与
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| 在proton平台前期建库过程中，配置75%酒精纯化的原理和作用是什么？如果是去除盐离子，怎么个去除法？求教有心人。 |
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winyuyuyu123
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感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 13:25:32
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| 建库过程中有多个步骤会用到乙醇漂洗，如产物纯化步骤和目标大小片段筛选步骤。磁珠吸附法中，通过不同比例的磁珠Buffer可以选择性吸附目标大小的核酸，但此时溶液成分较为复杂，因为上一步的产物（如RT产物或者加接头的PCR产物）本身不够纯净，含有离子或酶等，且磁珠Buffer也含盐离子且有一定的毒性，因此在吸附核酸后需要漂洗。一般用70%或者75%乙醇漂洗磁珠，原因是75%乙醇能够溶解大部分盐离子，且核酸在这个浓度的乙醇中溶解度低，避免了核酸被洗脱（主要原因）。可以理解为：核酸倍吸附在磁珠上，原来的缓冲液很脏，倒掉后磁珠上及管壁等还有很多盐离子或蛋白等，用乙醇漂洗几次后，磁珠及离心管彻底纯净了，但还剩少部分未除尽的乙醇。此时需要彻底晾干磁珠，再加入dd水或TE Buffer，可溶解核酸并将其从磁珠上洗脱，去掉磁珠后即可获得纯净的核酸样本，用于后续上机测序。 |
2楼2016-10-21 13:07:48
3楼2018-08-24 16:26:35