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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 配置75%酒精纯化的原理和作用是什么？
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暖暖032

新虫 (初入文坛)

[求助] 配置75%酒精纯化的原理和作用是什么？ 已有1人参与

在proton平台前期建库过程中，配置75%酒精纯化的原理和作用是什么？如果是去除盐离子，怎么个去除法？求教有心人。
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1楼 2016-10-20 19:42:02
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winyuyuyu123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-21 13:25:32
xn8008: 应助指数+1 2016-10-21 13:25:37
建库过程中有多个步骤会用到乙醇漂洗，如产物纯化步骤和目标大小片段筛选步骤。磁珠吸附法中，通过不同比例的磁珠Buffer可以选择性吸附目标大小的核酸，但此时溶液成分较为复杂，因为上一步的产物（如RT产物或者加接头的PCR产物）本身不够纯净，含有离子或酶等，且磁珠Buffer也含盐离子且有一定的毒性，因此在吸附核酸后需要漂洗。一般用70%或者75%乙醇漂洗磁珠，原因是75%乙醇能够溶解大部分盐离子，且核酸在这个浓度的乙醇中溶解度低，避免了核酸被洗脱（主要原因）。可以理解为：核酸倍吸附在磁珠上，原来的缓冲液很脏，倒掉后磁珠上及管壁等还有很多盐离子或蛋白等，用乙醇漂洗几次后，磁珠及离心管彻底纯净了，但还剩少部分未除尽的乙醇。此时需要彻底晾干磁珠，再加入dd水或TE Buffer，可溶解核酸并将其从磁珠上洗脱，去掉磁珠后即可获得纯净的核酸样本，用于后续上机测序。
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2楼2016-10-21 13:07:48
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ybs1987

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by winyuyuyu123 at 2016-10-21 13:07:48
建库过程中有多个步骤会用到乙醇漂洗，如产物纯化步骤和目标大小片段筛选步骤。磁珠吸附法中，通过不同比例的磁珠Buffer可以选择性吸附目标大小的核酸，但此时溶液成分较为复杂，因为上一步的产物（如RT产物或者加接 ...

我想请问一下：核酸是在磁珠中高盐绑定，低盐洗脱的。乙醇去除了盐离子，核酸不会从磁珠上掉下来吗？虽然不溶于75%乙醇，但会呈悬浮状态，跟随乙醇被吸走？
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悲哀
3楼2018-08-24 16:26:35
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