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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » TA 克隆连接转化无结果
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banmaoyao

新虫 (初入文坛)
阳性对照不长要不就是连接酶问题，要不就是感受太问题。对照太少了分析不出来

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11楼2016-10-21 10:37:24
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朱庆平

铜虫 (小有名气)
楼主好任性，居然用了5个试剂盒，看起来你们老板应该不是没钱的主，那么感受态为什么要自己制作呢？何不去购买成品？从你的描述来看，最大的可能应该是感受态接受外来DNA的能力有问题。
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12楼2016-10-21 17:30:00
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朱庆平

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Demon黄 at 2016-10-20 16:34:26
会不会是转化的时候出现问题

要我看，十有八九是你的感受态有问题。
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13楼2016-10-21 17:31:43
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Gengli0909

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 朱庆平 at 2016-10-21 17:30:00
楼主好任性，居然用了5个试剂盒，看起来你们老板应该不是没钱的主，那么感受态为什么要自己制作呢？何不去购买成品？从你的描述来看，最大的可能应该是感受态接受外来DNA的能力有问题。

买回来感受态了，然而不让用，如果连接转化后复苏摇完就有沉淀是不是就死了呀，悲催

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14楼2016-10-21 18:32:16
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Gengli0909

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 朱庆平 at 2016-10-21 17:31:43
要我看，十有八九是你的感受态有问题。...

感受态换了两批了，都没结果呜呜

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15楼2016-10-21 18:33:02
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zyfskj

新虫 (著名写手)
连接T载体，12到16小时，转入感受态。转化第一步，把连接产物加进去，连接T的基因大小也会影响你的转化结果。我之前连一个16k的基因，一个月都没做出来。再就是你操作过程中，加完样后用手轻轻拨几下就行，否则感受态容易破坏。冰上放置1小时，42度水浴1分30秒，冰上放置1分30秒，就可以加800LB，此LB无抗性。是为了让你的菌能长起来不至于被杀死。一个小时后，离心后留200微升涂布抗性平板。我们的平板是100ug/ml氨苄 ，用的JM109

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Gengli0909
向我乞求怜悯吧，我会狠狠拒绝的。
16楼2016-10-22 09:32:40
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Gengli0909

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by zyfskj at 2016-10-22 09:32:40
连接T载体，12到16小时，转入感受态。转化第一步，把连接产物加进去，连接T的基因大小也会影响你的转化结果。我之前连一个16k的基因，一个月都没做出来。再就是你操作过程中，加完样后用手轻轻拨几下就行，否则感受 ...

有道理，我从头试试，衷心感谢

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17楼2016-10-22 10:20:52
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先确定你用的taq酶会不会在pcr产物末端加碱基A，如果不是的话得用加A试剂盒处理一下，然后就是你阳性对照也没长，很大可能是没连上
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···
18楼2016-10-22 12:21:23
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HOTSTAR

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by zyfskj at 2016-10-22 09:32:40
连接T载体，12到16小时，转入感受态。转化第一步，把连接产物加进去，连接T的基因大小也会影响你的转化结果。我之前连一个16k的基因，一个月都没做出来。再就是你操作过程中，加完样后用手轻轻拨几下就行，否则感受 ...

亲 我想问一下16K基因最后是怎么做出来的 有什么需要注意的地方 我也一直没有做出来好几个星期了
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19楼2017-03-18 10:38:29
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中洪小刘

新虫 (小有名气)
解决了吗

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20楼2017-03-19 23:03:53
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