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Gengli0909

新虫 (初入文坛)

[求助] TA 克隆连接转化无结果已有3人参与

大神们,我想问一下将质粒PCR用rtaq酶以后的产物胶回收然后用T载体连接试剂盒连接,转化至自己做的感受态DH5a中,已经重复了很多次,换了五个试剂盒了转化都没有任何菌落生长出,连试剂盒里的阳性对照都一个菌没长,好崩溃,拜托亲们帮帮忙,找一下原因,我愿意给出我所有的金币,但可能是新手有点少,帮帮忙

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新虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by zyfskj at 2016-10-22 09:32:40
连接T载体,12到16小时,转入感受态。转化第一步,把连接产物加进去,连接T的基因大小也会影响你的转化结果。我之前连一个16k的基因,一个月都没做出来。再就是你操作过程中,加完样后用手轻轻拨几下就行,否则感受 ...

亲 我想问一下16K基因最后是怎么做出来的 有什么需要注意的地方 我也一直没有做出来好几个星期了
19楼2017-03-18 10:38:29
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Demon黄

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
会不会是转化的时候出现问题
2楼2016-10-20 16:34:26
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Gengli0909

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Demon黄 at 2016-10-20 16:34:26
会不会是转化的时候出现问题

有道理,能再细一点吗,比如说哪个步骤出了问题?

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3楼2016-10-20 16:41:08
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Demon黄

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Gengli0909 at 2016-10-20 16:41:08
有道理,能再细一点吗,比如说哪个步骤出了问题?
...

热休克后应该加入无氨苄抗性的LB,然后再摇菌50分钟
4楼2016-10-20 16:51:15
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