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新虫 (初入文坛)

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[交流] 小鼠活体成像实验经验分享已有1人参与

1. 对于有毛小鼠（如ICR鼠、昆明鼠、C57鼠等），我们强烈建议在成像实验的前一天进行脱毛，从而最大限度地消除毛发的背景荧光和其他干扰。小鼠毛发在短波长激发光下的背景荧光尤为显著，如下图的两只ICR小鼠（白毛），左边小鼠已剃毛，右边小鼠未剃毛，在465 nm光激发下，可以明显看出毛发的背景荧光。

2. 小鼠剃毛方法主要包括剃毛器、脱毛膏、化学试剂脱毛（如硫化钠），我们比较建议使用小鼠剃毛器进行脱毛，因为脱毛膏含有一些芳香成分可能会带来背景荧光，而且脱毛膏和硫化钠等化学试剂均可能对小鼠皮肤造成灼伤，伤口处有时会伴随着较强的背景荧光。PerkinElmer小鼠剃毛器套装可以很好地对小鼠进行脱毛，小鼠麻醉后，先使用较大的方头剃毛器逆着小鼠毛发的方向进行推动，推动时可以轻轻贴着小鼠皮肤但不要用力按压在皮肤上，方头剃毛器可以剃除小鼠身上绝大部分毛发，但由于刀头的缘故可能会留着约1 mm长的短毛，接着可以使用小的圆头的剃毛器对剩余的短毛进行处理。小鼠剃毛器使用5号干电池，套装内的小瓶装油可以用于刀头的润滑。
3. 鼠粮对小鼠成像也会带来一定干扰，常规的鼠粮中含有苜蓿等成分，这些成分在特定波段下会产生背景荧光，如下图左，在Emission 740 nm的波段下，小鼠腹腔中有明显的食物荧光信号；下图右是胃肠中食物荧光信号的3D透射成像图。

为尽量避免来自食物的荧光，我们建议选用不含苜蓿等成分的鼠粮，或者实验前一天对小鼠进行禁食，但不要禁水。
4. 小鼠在成像前建议先用温水浸湿的纱布搽拭口鼻、爪子以及排尿处，因为这些部位常伴随着不必要的背景荧光。
5. 在荧光光谱分离时，有时信号较弱难以识别。可以使用一个黑色底不透的96孔板，板中加入适当浓度的染料/标准样品（染料信号强度与目标信号强度约在同一级别，不能过高以免干扰目标信号），如下图。96孔板放在实验小鼠右侧，实验小鼠的左侧放一只空白对照小鼠。在光谱分离时，在左侧对照鼠身上划取背景线（常用耳部、口鼻处等），在96孔板中的染料样品处划取目标信号，然后进行光谱分离。

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