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Nigori

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[交流] 肿瘤细胞诱导血管生成模型实验已有1人参与

肿瘤细胞实质就是肿瘤。肿瘤组织由实质和间质两部分构成，肿瘤实质是肿瘤细胞，是肿瘤的主要成分，具有组织来源特异性。它决定肿瘤的生物学特点以及每种肿瘤的特殊性。

实验方法原理

无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2 mm，都会有血管生成。这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。

实验材料肿瘤细胞

试剂、试剂盒 DEM、藻酸钠、NaCl、EDTA、CaCl2、台盼蓝、甲醛

仪器、耗材离心机、分光光度计、γ计数仪

实验步骤

1. 用DEM培养液洗涤对数生长期的肿瘤细胞，收集并重新悬浮细胞于DEM培养液中。

2. 悬浮的肿瘤细胞与1.2%藻酸钠溶液混合，稀释后的藻酸钠浓度为0.8%，细胞浓度为（1~5）×106细胞/ml。

3. 把0.8%藻酸钠的肿瘤细胞稀释液装入喷雾器内，用力使液体压出喷嘴。

4. 当水溶性的藻酸钠与80 mmol/l CaCl2混合，Na+被Ca2+取代后变成胶。

5. 空气压力和喷出的速度决定藻酸钠胶粒的大小，可用培养液或0.15 mol/ NaCl漂洗胶粒。

6. 加入0.5 ml含有1%EDTA的0.9%NaCl溶液至0.5 ml 藻酸钠包埋的细胞中。

7. EDTA能破坏Ca2+与藻酸的结合键，使胶转变成液体。

8. 台盼蓝测定肿瘤细胞。

9. 用50%的藻酸钠溶液稀释包埋细胞，以便在恒定体积内得到所需的肿瘤细胞数。

10. 用21号针沿腹白线皮下注射200 ul 藻酸钠溶液包埋的肿瘤细胞，以藻酸钠溶液作为对照。

11. 3~21天后，处死动物，从腹部皮下分离出藻酸盐胶粒：

（1）10%中性甲醛固定，石蜡包埋，切片，染色，进行组织化学和免疫化学检查。

（2）诸葛将其称重，于室温下载水中浸泡、摇动过夜，采用Drabkin’s分析方法在分光光度计540 nm 测定上清液中的血红蛋白含量。

（3）在处死动物前1 h，把51Cr标记的红细胞从尾静脉注射至小鼠体内。

（4）拉颈处死小鼠后，将分离出的藻酸钠胶粒和远离胶粒的一块组织称重，并用γ计数仪测定放射性。

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