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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 多粘类芽孢杆菌RNA提取受阻，求大神帮忙！！
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紫雾小橙

新虫 (初入文坛)

[求助] 多粘类芽孢杆菌RNA提取受阻，求大神帮忙！！ 已有2人参与

我的培养基里含有碳酸钙，而且发酵完产生大量的多糖。所以提RNA很困难，提了两个多月了，依旧没什么效果，知道小木虫大神多，所以请教一下！！    以下是发酵液4℃离心后的离心管。。

多粘类芽孢杆菌RNA提取受阻，求大神帮忙！！


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1楼 2016-10-18 10:31:46
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thiophene9859

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

提取RNA，一点点菌体就够了。如果确定是多糖干扰，培养基可以少加点糖或者不加糖，不加碳酸钙也无所谓的，提取核算，又不需要高密度，菌体多少能长出一点就可以了。
做这个，是华东理工的吗
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2楼2016-10-28 15:34:22
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过烟云烟

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

用差速离心法把菌和碳酸钙分开，两个的沉降系数应该不一样，然后再收集细菌提

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once you've accepted your flaws, no one can use them against you.
3楼2016-10-28 19:39:03
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紫雾小橙

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by thiophene9859 at 2016-10-28 15:34:22
提取RNA，一点点菌体就够了。如果确定是多糖干扰，培养基可以少加点糖或者不加糖，不加碳酸钙也无所谓的，提取核算，又不需要高密度，菌体多少能长出一点就可以了。
做这个，是华东理工的吗

谢谢，我是培养基优化 测转录组 所以糖的含量不能轻易的改变。至于碳酸钙去了以后影响发酵液的PH导致所产的抗生素量变得特别少。

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4楼2016-10-31 15:58:34
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紫雾小橙

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 过烟云烟 at 2016-10-28 19:39:03
用差速离心法把菌和碳酸钙分开，两个的沉降系数应该不一样，然后再收集细菌提

嗯嗯，谢谢你，我试试这个方法，但请问离心后那些黏黏的多糖怎么去除呀？

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5楼2016-10-31 15:59:53
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紫雾小橙

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by thiophene9859 at 2016-10-28 15:34:22
提取RNA，一点点菌体就够了。如果确定是多糖干扰，培养基可以少加点糖或者不加糖，不加碳酸钙也无所谓的，提取核算，又不需要高密度，菌体多少能长出一点就可以了。
做这个，是华东理工的吗

我不是华东理工的，山东一个普通的学校。

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6楼2016-10-31 16:00:32
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过烟云烟

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 紫雾小橙 at 2016-10-31 15:59:53
嗯嗯，谢谢你，我试试这个方法，但请问离心后那些黏黏的多糖怎么去除呀？
...

我提的时候没管那么多，直接把多糖用移液枪吸除，取下面菌的

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once you've accepted your flaws, no one can use them against you.
7楼2016-10-31 16:13:38
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紫雾小橙

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 过烟云烟 at 2016-10-31 16:13:38
我提的时候没管那么多，直接把多糖用移液枪吸除，取下面菌的
...

很容易就提出来了吗？

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8楼2016-10-31 19:26:33
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过烟云烟

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 紫雾小橙 at 2016-10-31 19:26:33
很容易就提出来了吗？
...

還好，提了2次，測了浓度还行

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once you've accepted your flaws, no one can use them against you.
9楼2016-10-31 19:28:26
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