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lhy31104铁虫 (著名写手)
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[交流]
利用DNS测食用真菌胞外酶活，酶活几乎测不出来 已有5人参与
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就我目前实验出现的一些一直让我头疼的问题，冒昧来叨扰大家了，真切的恳求会的人能给我一些指导。 目前碰到的问题是：已离心后的发酵液为粗酶液。在做淀粉酶、CMC酶活时，空白组加入已煮沸灭活的粗酶液，再加入DNS煮沸5分钟后，和实验组颜色一样（即使粗酶液稀释10倍）后，颜色都变深了，导致利用紫外光分光光度计测得的酶活值很低，几乎测不出来。但是许多文献证明这类真菌含有这些酶。 课题组下师兄师姐也没人做这个方向，我无法找到合适的人答疑解惑，这个问题困扰我很长时间了，想放弃但又倔强的想坚持。可能是我愚钝了，研究了两个月，还是无法解决。 实验方案如下： 液体种子培养基：葡萄糖30 g/L，蛋白胨2 g/L，酵母膏6 g/L，KH2PO4 0.5 g/L，MgSO4•7H2O 0.5 g/L；pH自然。 液体发酵培养基：葡萄糖50 g/L，蛋白胨5 g/L，酵母膏10 g/L，KH2PO4 2 g/L，MgSO4•7H2O 2 g/L；pH自然。 可能是是培养基成分单一，没有相关酶生长的底物。故更换了液体发酵培养基，液体发酵培养基:土豆200 g/L，葡萄糖30 g/L，蛋白胨3 g/L，KH2PO43 g/L，MgSO4•7H2O 3 g/L，VB1 10mg/L，pH自然。但是还是出现相同的情况，实验组和空白组颜色几乎一致，颜色都变深，酶活几乎测不出来。 也将粗酶液稀释10倍，以期降低粗酶液还原糖含量高造成的影响，甚至延长保温酶解时间，进行实验，也几乎测不出酶活。 |
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虫chonny
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5楼2020-04-13 10:01:22
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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请问你这个问题怎么解决的最后？我也是因为这个研究了两个月了快。我试了试空白加入DNS之后再加不灭活的粗酶液，貌似有点用，但不知道这样做可不可以。请问你最后怎么解决的 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2017-05-24 00:08:57
t朵朵3楼2017-06-05 16:54:55
4楼2017-06-05 22:53:14
10