| 查看: 2159 | 回复: 4 | |||
[交流]
慢病毒包装实验 已有4人参与
|
|
实验材料 病毒 试剂、试剂盒 无血清培养基、脂质体、胰酶、含血清的培养基、DMEM 仪器、耗材 EP管、6孔板、CO2培养箱、高速离心机、-80°C冰箱 实验步骤 以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293T细胞。 1. 取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清培养基。轻柔混匀，室温孵育5min。 2. 取1.5ml灭菌EP管，取9μl 脂质体2000l溶于250μl无血清培养基中。轻柔混匀，室温孵育5min。 3. 将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20min 4. 用胰酶消化并记数293T细胞。用含血清的培养基重悬细胞。 5. 在六孔板中每孔，加入1ml含血清的生长培养基，再加入DNA-脂质体复合物。 6. 将1ml重悬的293T细胞（1×106个细胞/ml）加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育过夜。 7. 移除含有DNA-脂质体复合物的培养基移除，代之以DMEM（含丙酮酸钠和非必须氨基酸）。 8. 转染后48-72h收获含病毒的上清。3000 rpm 离心20min，去除沉淀。 9. 病毒上清-80°C贮存。 包装出来的慢病毒对NIH/3T3细胞达90%以上感染效率。 |
回复此楼» 猜你喜欢
求调剂
已经有4人回复
-
一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂
已经有3人回复
-
调剂310
已经有4人回复
-
北科281学硕材料求调剂
已经有16人回复
-
一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂
已经有6人回复
-
一志愿哈工大，085400，320，求调剂
已经有4人回复
-
316求调剂
已经有9人回复
-
085600 材料与化工 329分求调剂
已经有8人回复
-
0856求调剂
已经有6人回复
-
299求调剂
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 慢病毒载体质粒测序验证----------急救！！！！！
已经有2人回复
- 有需要包装慢病毒或构建细胞系的童鞋吗
已经有15人回复
- rev在慢病毒包装中是否必须？
已经有2人回复
- pLenti6.3-IRES2-EGFP/V5 DEST 慢病毒表达体系原理
已经有4人回复
 |
2楼2016-10-10 21:02:01
匿名
用户注销 (正式写手)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 4476.8
- 散金: 33
- 红花: 4
- 帖子: 743
- 在线: 156.8小时
- 虫号: 0
- 注册: 2015-08-31
- 性别: GG
- 专业: 兽医传染病学
3楼2016-10-11 22:15:39
王加菲猫
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6451.1
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 945
- 在线: 127.7小时
- 虫号: 3492409
- 注册: 2014-10-22
- 性别: MM
- 专业: 认知科学
4楼2016-10-11 22:17:26
匿名
用户注销 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2167.1
- 散金: 288
- 红花: 4
- 帖子: 726
- 在线: 412.6小时
- 虫号: 0
- 注册: 2010-11-19
- 性别: GG
- 专业: 数论
5楼2017-11-13 19:53:18
5