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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 酿酒酵母细胞破壁
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775807412

新虫 (初入文坛)

[求助] 酿酒酵母细胞破壁 已有4人参与

我在酿酒酵母细胞中胞内表达了我的蛋白，蛋白带his标签准备用亲和层析柱分离蛋白，但是用超声波破碎效果不好，请问哪位大神指点哈酿酒酵母怎么破壁好又不影响蛋白活性？感激不尽！

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1楼 2016-10-08 21:13:17
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scofield111

银虫 (正式写手)
我一直用蜗牛酶，可能会出现蜗牛酶破壁不全，你试试，想做再联系我，我做的也是胞内酶

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6楼2016-10-11 17:50:21
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
推荐蜗牛酶比较好！！！

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775807412
2楼2016-10-08 22:27:27
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775807412

新虫 (初入文坛)
请问你用过吗？会不会成本比较高？多少酶可以破多少细胞

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3楼2016-10-08 23:04:05
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suninghao

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我原来做过法夫酵母破壁，用的机器是广州聚能公司的均质机，JNBIO品牌的，破壁率在百分之八十多吧，过机一次效果就很明显，还不错，你可以联系下，他们免费测样的
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4楼2016-10-11 12:56:13
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scofield111

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 775807412 at 2016-10-18 15:09:26
请问你们买的那个公司的蜗牛酶？你们具体都是怎么操作的？谢谢！
...

索莱宝或生工的，你去看知网一篇中科院生物物理研究所的文章7几年的，蜗牛酶，就按他的办法，可以的

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11楼2016-10-18 20:17:43
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egmnmt65

金虫 (初入文坛)
用极小的玻璃珠，与菌体的体积1:1，为了保证蛋白不失活涡旋30秒放在冰上冷冻30秒，持续30次

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14楼2016-10-21 13:35:08
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
sigma的lyticase非常好用

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21楼2016-11-28 10:59:11
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普通回帖

发酵流程卡

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
既能破壁又不能丧失蛋白活性，这就要求在破壁过程中既不能有大量热产生，又不能加入蛋白酶酶解，更不能混入酸碱。所以最好的方法是在0—4℃的条件下，机械破壁，而像酿酒酵母这么小的菌体，也就只能使用匀质机了。
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做最真实的自己
5楼2016-10-11 17:21:34
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775807412

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by suninghao at 2016-10-11 12:56:13
我原来做过法夫酵母破壁，用的机器是广州聚能公司的均质机，JNBIO品牌的，破壁率在百分之八十多吧，过机一次效果就很明显，还不错，你可以联系下，他们免费测样的

匀质机破碎是在低温下吗？因为我要提蛋白，温度不能太高怕变性

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7楼2016-10-17 11:24:13
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luckydog52

木虫 (著名写手)
液氮研磨试试看

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自信源于一次次成功的积累
8楼2016-10-17 13:12:14
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775807412

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by scofield111 at 2016-10-11 17:50:21
我一直用蜗牛酶，可能会出现蜗牛酶破壁不全，你试试，想做再联系我，我做的也是胞内酶

请问你们买的那个公司的蜗牛酶？你们具体都是怎么操作的？谢谢！

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9楼2016-10-18 15:09:26
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775807412

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by luckydog52 at 2016-10-17 13:12:14
液氮研磨试试看

效果怎么样，能达到多少的破壁率？

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10楼2016-10-18 15:10:24
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