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775807412

新虫 (初入文坛)

[求助] 酿酒酵母细胞破壁 已有4人参与

我在酿酒酵母细胞中胞内表达了我的蛋白,蛋白带his标签准备用亲和层析柱分离蛋白,但是用超声波破碎效果不好,请问哪位大神指点哈酿酒酵母怎么破壁好又不影响蛋白活性?感激不尽!

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scofield111

银虫 (正式写手)

我一直用蜗牛酶,可能会出现蜗牛酶破壁不全,你试试,想做再联系我,我做的也是胞内酶

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6楼2016-10-11 17:50:21
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
推荐蜗牛酶比较好!!!

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2楼2016-10-08 22:27:27
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775807412

新虫 (初入文坛)

请问你用过吗?会不会成本比较高?多少酶可以破多少细胞

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3楼2016-10-08 23:04:05
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suninghao

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我原来做过法夫酵母破壁,用的机器是广州聚能公司的均质机,JNBIO品牌的,破壁率在百分之八十多吧,过机一次效果就很明显,还不错,你可以联系下,他们免费测样的
4楼2016-10-11 12:56:13
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scofield111

银虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 775807412 at 2016-10-18 15:09:26
请问你们买的那个公司的蜗牛酶?你们具体都是怎么操作的?谢谢!
...

索莱宝或生工的,你去看知网一篇中科院生物物理研究所的文章7几年的,蜗牛酶,就按他的办法,可以的

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11楼2016-10-18 20:17:43
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egmnmt65

金虫 (初入文坛)

用极小的玻璃珠,与菌体的体积1:1,为了保证蛋白不失活涡旋30秒放在冰上冷冻30秒,持续30次

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14楼2016-10-21 13:35:08
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


21楼2016-11-28 10:59:11
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普通回帖

发酵流程卡

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
既能破壁又不能丧失蛋白活性,这就要求在破壁过程中既不能有大量热产生,又不能加入蛋白酶酶解,更不能混入酸碱。所以最好的方法是在0—4℃的条件下,机械破壁,而像酿酒酵母这么小的菌体,也就只能使用匀质机了。
做最真实的自己
5楼2016-10-11 17:21:34
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775807412

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by suninghao at 2016-10-11 12:56:13
我原来做过法夫酵母破壁,用的机器是广州聚能公司的均质机,JNBIO品牌的,破壁率在百分之八十多吧,过机一次效果就很明显,还不错,你可以联系下,他们免费测样的

匀质机破碎是在低温下吗?因为我要提蛋白,温度不能太高怕变性

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7楼2016-10-17 11:24:13
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luckydog52

木虫 (著名写手)

自信源于一次次成功的积累
8楼2016-10-17 13:12:14
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775807412

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by scofield111 at 2016-10-11 17:50:21
我一直用蜗牛酶,可能会出现蜗牛酶破壁不全,你试试,想做再联系我,我做的也是胞内酶

请问你们买的那个公司的蜗牛酶?你们具体都是怎么操作的?谢谢!

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9楼2016-10-18 15:09:26
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775807412

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by luckydog52 at 2016-10-17 13:12:14
液氮研磨试试看

效果怎么样,能达到多少的破壁率?

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10楼2016-10-18 15:10:24
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