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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因构建到表达载体上一直检测不到过表达
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浩儿哥

金虫 (小有名气)
不懂，但是很厉害帮顶！

发自小木虫IOS客户端
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只有成功才能证明你曾经努力过
11楼2016-10-10 11:20:26
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王旭昉

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by pf790352975 at 2016-10-09 22:39:46
柔性肽是啥？作用是什么？
说明你的目的蛋白未表达或表达量太低  ，原因应该很多种，各个环节都可能出错。
克隆载体转染到细胞应该不会表达目的蛋白 ，缺乏启动子等表达元件。

柔性肽是根据别人的表达载体设计的，目的基因直接连接标签基因可能会影响标签的表达，所以加了一段柔性肽，目前只能从构建表达载体之后寻找问题了。要不就需要重新构建载体。
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我就是我
12楼2016-10-10 12:18:49
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王旭昉

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by pf790352975 at 2016-10-09 22:41:15
你的目的基因载体能看到绿色荧光吗？...

那个的GFP被切除掉了，怕影响目的基因的表达，用目的基因替换了那段GFP基因。
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我就是我
13楼2016-10-10 12:19:48
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王旭昉

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2016-10-10 09:10:44
你的目的蛋白会不会稳定性很差？有没有切除GFP之前检测？...

有可能，这是一个分泌蛋白，切除GFP之前没有检测，这个要如何去检测呢？
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我就是我
14楼2016-10-10 12:21:10
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王旭昉

银虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 浩儿哥 at 2016-10-10 11:20:26
不懂，但是很厉害帮顶！

哎，隔行如隔山了
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我就是我
15楼2016-10-10 13:12:48
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 王旭昉 at 2016-10-10 12:21:10
有可能，这是一个分泌蛋白，切除GFP之前没有检测，这个要如何去检测呢？...

你不是还带有HA标签么？用HA的抗体检测或者你目的蛋白的特异性抗体检测
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16楼2016-10-10 13:46:22
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star013

新虫 (知名作家)
我们公司可以提供该技术服务

发自小木虫Android客户端
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17楼2016-10-10 16:43:32
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王旭昉

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2016-10-10 13:46:22
你不是还带有HA标签么？用HA的抗体检测或者你目的蛋白的特异性抗体检测...

恩 这两天做一个瞬时表达，转染一下看看能不能检测到蛋白。
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我就是我
18楼2016-10-10 19:15:43
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匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
19楼2016-10-10 21:51:25
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yuy111

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

老师建议是对的，可以排除载体表达蛋白是否有问题。 如果构建的载体蛋白表达没有问题， 有可能是病毒包装和转染的问题。
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20楼2016-10-12 11:26:24
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