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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒载体上的N1和C1是什么意思，然后选定的两个酶切序列放在哪个引物上
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华西Aspirin

新虫 (初入文坛)

[交流] 质粒载体上的N1和C1是什么意思，然后选定的两个酶切序列放在哪个引物上

质粒载体上的N1和C1是什么意思，然后双酶切选定的两个酶是放在正向引物还是反向引物上有没有讲究。比如pmcherry-N1为载体，选择了ECORI和kpnI，这两个酶切序列哪个放在正向引物上，哪个放在反向，有讲究吗？

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1楼 2016-10-06 11:03:24
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-07 17:59:50
xn8008: 应助指数+1 2016-10-07 17:59:55
N1、C1的意思是外源基因编码蛋白与载体带的荧光蛋白的融合方式，N1表示你的外援蛋白与荧光蛋白N端融合，C1表示与荧光蛋白的C端相连，因为涉及到融合翻译表达，所以方向很重要，载体图上在前面的酶对应你的上游引物，下游引物在后面的酶切位点处。
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2楼2016-10-07 17:37:19
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queen3511

铜虫 (小有名气)
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-08 00:01:17
当然有讲究，这很重要！序列上靠前的酶切位点就放在上游引物上，另一个放下游引物上，然后引物前还要加保护碱基的

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3楼2016-10-07 23:45:17
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werq63

金虫 (著名写手)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-10-07 17:37:19
N1、C1的意思是外源基因编码蛋白与载体带的荧光蛋白的融合方式，N1表示你的外援蛋白与荧光蛋白N端融合，C1表示与荧光蛋白的C端相连，因为涉及到融合翻译表达，所以方向很重要，载体图上在前面的酶对应你的上游引物， ...

这个好像说反了，pegfp n1带的是c gfp

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4楼2016-10-08 00:34:48
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