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酶联反应的显色问题
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最近在做酶联实验 请各位多提提宝贵建议 非常感谢！ 实验步骤是加入链霉亲和素（SA）包被酶标板过夜，之后加入生物素标记的单链DNA（BIO-DNA）孵育1小时固定，后加入生物素标记的DNA反义链（BIO-反义链）与待测样品竞争结合BIO-DNA的结合位点，通过显色反应判断样品中是否含目标物。 在进行BIO-DNA浓度优化时，我有尝试过固定好DNA后，分别加入HRP-Biotin和HRP-SA进行颜色对比看DNA的固定效果。前边条件都一样的情况下，加入HRP-Biotin的OD值为0.0228（几乎无色），HRP-SA的OD值为0.8904（颜色明显）。 按理说如果DNA在板上饱和后，加入HRP-Biotin应无颜色出现（板上的SA位点全被DNA占据），HRP-SA也不该出现颜色。可是我的实验中HRP-SA加入后体系为什么会有颜色呢？有没有可能是DNA还未饱和，板上的SA与HRP-SA结合呢？（所做实验洗板完全，且在无SA包被板上做对比试验时，无SA包被的板上无色） 大家帮忙看看问题出在哪了 |
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