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若行山水

铜虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖凝胶过程中Marker模糊怎样改进

第一张胶图和第二章胶图用的是同一块胶,第一张胶图的第一个Maker 为1000,第二个maker为15000,第二张胶图的第一个maker 为500,第二个maker为1000,条件均为120V,30 min。第二个胶图中的胶用一次性手PE套放包裹放4度冰箱过夜第二天跑胶用的,但不知道为什么第二个胶的Maker很模糊,请问这是什么原因?

琼脂糖凝胶过程中Marker模糊怎样改进
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琼脂糖凝胶过程中Marker模糊怎样改进-1
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lmt199608

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
若行山水: 金币+20, 博学EPI+1 2016-10-08 20:50:07
引用回帖:
3楼: Originally posted by 若行山水 at 2016-09-29 11:18:50
maker不是溶解之后放四度就可以了?
...

那个第二张图的所有图谱都模糊,你的胶放了一夜,缓冲液也要保证新鲜些才行。我的就是隔夜的,也遇到同样的情况,是DNA图谱,有RNA污染不说,条带也是巨模糊,点Maker的那个空尽量远离其他点样孔避免污染。
琼脂糖凝胶过程中Marker模糊怎样改进-2



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5楼2016-09-29 11:36:19
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lmt199608

新虫 (初入文坛)

我们实验室的Maker是-20℃保存,用的时候加热。电泳时间过长Maker会模糊,而且我觉得4℃冰箱保存是温度不适合或者时间过长导致变性的。个人意见

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2楼2016-09-29 11:02:26
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若行山水

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lmt199608 at 2016-09-29 11:02:26
我们实验室的Maker是-20℃保存,用的时候加热。电泳时间过长Maker会模糊,而且我觉得4℃冰箱保存是温度不适合或者时间过长导致变性的。个人意见

maker不是溶解之后放四度就可以了?

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3楼2016-09-29 11:18:50
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lmt199608

新虫 (初入文坛)

如果两个胶是你一起做的,有的maker能跑出清晰的条带,就说明不是煮胶的问题。还有就是配胶缓冲液和电泳的缓冲液浓度保持一致。还有就是电泳的时间,电压,甚至电流。我们的maker是-20℃冷藏分装保存的,用的时候再加热5min。maker不同厂家生产的应该有配套的说明书,尽量按照它的说明书操作。

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4楼2016-09-29 11:27:23
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