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z妲妲

新虫 (小有名气)

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专业: 细胞生物学研究中的新方法

[交流] 细胞瞬时转染已有2人参与

原理：

通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后48小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。

应用：

观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（短时间即可进行观察，但效应会很快丢失）。

一般流程：

1）细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖。

2）细胞转染（脂质体、电穿孔、FuGENE6等）

3）48小时以后鉴定目的基因的表达情况。

前期准备：

l构建好的外源基因载体，或目的基因基本信息。

l待转染的细胞系（1×106个细胞，可传代，倍增时间小于48小时）以及细胞培养条件的说明。

l若需要检测靶基因的表达，请提供相应抗体。

结果呈现：

构建好的瞬时转染细胞及相关的外源基因表达分析。

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1楼 2016-09-27 14:29:06

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engreen2016

禁虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

本帖内容被屏蔽

2楼2016-09-28 09:16:36

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z妲妲

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by engreen2016 at 2016-09-28 09:16:36
已有众多的文献报道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与 PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr; ...

好的，谢谢