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fzhrobin

木虫 (正式写手)

[交流] 请教

本人在实验中遇到了个问题，请教下各位专家：
植物蛋白已经用TCA/丙酮法提取到了。下面要进行酶解，酶解之后上质谱。参考别人的文献，在酶解前在提取到的200ug粗蛋白中加入200ul裂解液（8M urea/4%CHAPS/40mM Tris/65mM DTT），震荡混匀后，又加入2ul的1M DTT（使其终浓度为10mM，这个浓度似乎是必须的）。

问题来了，我的裂解液成分中加入65mM DTT对不对？貌似再加2ul1M DTT浓度不会是10mM啊？反而是裂解液中不加65mM DTT的话，最终浓度是对的。
到底问题出在哪里呢？有没有必要加入两次DTT？如果必须加的话，两步的作用有什么不同？
“200ug粗蛋白中加入200ul裂解液”这步该如何操作？还是志200ul裂解液中含200ug粗蛋白？

请高手指教，谢谢！
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1楼 2016-09-26 09:21:34
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dsctg
★
fzhrobin(金币+1): 谢谢参与
2楼2016-09-26 09:39:38
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270444808
★
fzhrobin(金币+1): 谢谢参与


发自小木虫Android客户端
3楼2016-09-26 12:15:27
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tableman
★
fzhrobin(金币+1): 谢谢参与
4楼2016-09-29 20:58:50
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psylhh
★
fzhrobin(金币+1): 谢谢参与
祝福！
5楼2016-09-29 21:00:10
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tzynew
★
fzhrobin(金币+1): 谢谢参与
6楼2016-09-29 21:11:12
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caoquanrang
7楼2016-10-02 09:46:21
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caoquanrang
8楼2016-10-02 09:46:33
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shenrenren
9楼2016-10-02 09:51:20
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