应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 请教
91/1返回列表
查看: 700  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fzhrobin

木虫 (正式写手)

[交流] 请教

本人在实验中遇到了个问题，请教下各位专家：
植物蛋白已经用TCA/丙酮法提取到了。下面要进行酶解，酶解之后上质谱。参考别人的文献，在酶解前在提取到的200ug粗蛋白中加入200ul裂解液（8M urea/4%CHAPS/40mM Tris/65mM DTT），震荡混匀后，又加入2ul的1M DTT（使其终浓度为10mM，这个浓度似乎是必须的）。

问题来了，我的裂解液成分中加入65mM DTT对不对？貌似再加2ul1M DTT浓度不会是10mM啊？反而是裂解液中不加65mM DTT的话，最终浓度是对的。
到底问题出在哪里呢？有没有必要加入两次DTT？如果必须加的话，两步的作用有什么不同？
“200ug粗蛋白中加入200ul裂解液”这步该如何操作？还是志200ul裂解液中含200ug粗蛋白？

请高手指教，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-09-26 09:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dsctg
★
fzhrobin(金币+1): 谢谢参与
2楼2016-09-26 09:39:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

270444808
★
fzhrobin(金币+1): 谢谢参与


发自小木虫Android客户端
3楼2016-09-26 12:15:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tableman
★
fzhrobin(金币+1): 谢谢参与
4楼2016-09-29 20:58:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

psylhh
★
fzhrobin(金币+1): 谢谢参与
祝福！
5楼2016-09-29 21:00:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tzynew
★
fzhrobin(金币+1): 谢谢参与
6楼2016-09-29 21:11:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caoquanrang
7楼2016-10-02 09:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caoquanrang
8楼2016-10-02 09:46:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenrenren
9楼2016-10-02 09:51:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fzhrobin 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +7 Lanmanbaby 2026-08-09 13/650 2026-08-09 19:04 by 天神眷顾
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +14 且听虎啸 2026-08-07 20/1000 2026-08-09 18:03 by 天神眷顾
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:19 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:22 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 15:59 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 15:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WQyTGMbfH7Cx 2026-08-07 4/200 2026-08-08 15:02 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭