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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 怎样在培养过程中让细胞破裂释放出蛋白?

怎样在培养过程中让细胞破裂释放出蛋白?
     有谁做过以大肠杆菌为表达宿主,然后在平板或者液体培养的过程中通过技术手段让大肠杆菌细胞破裂释放出目的蛋白。谁能告诉我好的方法奖励20个金币。谢谢!
[search]大肠杆菌表达[/search]
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霉菌
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

超声破碎,很常用的方法
2楼2008-11-22 19:13:15
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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)

在培养过程中也可以吗?我是要它表达出来后继续培养,然后我就可以通过筛选标志来进行筛选,比如透明圈之类的。
霉菌
3楼2008-11-22 19:20:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

取一部分出来破碎就行了……
4楼2008-11-22 21:09:48
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翱天

新虫 (初入文坛)

破碎了怎么还继续培养?

超声破碎,碱裂解法,压力变化法,渗透法,物理法。。。一大堆方法呢
路过。。。
5楼2008-11-23 11:04:00
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

比如500ml菌液,每次取个几十ml出来破碎,足够做n多的验证实验了
其余的菌液继续培养嘛……
6楼2008-11-24 19:50:37
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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)

谢谢大家的解答,不过你们的方法对我来说好像不是那么有效,因为我是做文库筛选的,要直观快速。
霉菌
7楼2008-11-25 09:08:41
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

★ ★ ★ ★ ★
gxsulong(金币+1,VIP+0):方法很好!谢谢解答。
gxsulong(金币+4,VIP+0):方法很好!谢谢解答。
在表达蛋白上再连一段信号肽,变成融合蛋白,,有助于跨膜。只是不一定有效。
金币是赌出来的
8楼2008-11-25 09:40:46
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ieg1983

★ ★ ★ ★ ★
gxsulong(金币+5,VIP+0):方法很好!但不是很适合我用,谢谢解答。
你可以试试在大肠杆菌分裂的时候加入青霉素,通过破坏细胞壁,裂解细胞释放蛋白。
9楼2008-11-25 13:45:12
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恩文

铜虫 (小有名气)

这个问题真好
静待答案
10楼2008-11-25 16:13:33
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