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minglong

金虫 (小有名气)

[交流] 紧急请教昆虫基因组DNA完整提取

我提的昆虫基因组DNA,除了分子量较大的主带外,在200-1000bp之间是很亮的一条弥散的条带,请问是什么原因啊?
我用的是STE+SDS+蛋白酶K消化过夜,然后苯酚、苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)、氯仿:异戊醇(24:1)依次抽提,几次重复均是除了大分子量的主带之外,还有200-1000bp之间的弥散的条带,而且很亮。我用CTAB也提了,结果差不多。我用的昆虫个体很小,每个还不到1mm,每次用300头,是从野外采来冻在-80°的材料。由于我后面要酶切,酶切之后需要回收200-1000bp的条带,因此,那些弥散的条带很让我头疼,不知是什么原因,请大家帮助啊
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

可能无需消化过夜……
加液氮研碎,然后消化50~60度消化30min试试
2楼2008-11-22 16:25:15
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