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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 跑SDS-PAGE，目的蛋白在30K左右，WB显示目的蛋白在90K左右，跪求大神解释
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hya1968


发自小木虫Android客户端
11楼2016-09-25 15:17:36
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枝山征明

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 沉默、颜泪 at 2016-09-25 08:44:05
很可能是三聚体，蛋白质的分子量刚好是3倍。并且，即使形成三聚体，30KD也该有蛋白印迹(主带)，90KD次带。

谢谢
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12楼2016-09-26 10:24:12
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枝山征明

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 沉默、颜泪 at 2016-09-25 08:44:05
很可能是三聚体，蛋白质的分子量刚好是3倍。并且，即使形成三聚体，30KD也该有蛋白印迹(主带)，90KD次带。

谢谢
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13楼2016-09-26 10:27:07
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枝山征明

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by linyingjia at 2016-09-24 23:24:43
不是杂带？

应该不是，几次都这样
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14楼2016-09-26 10:31:28
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沉默、颜泪

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 枝山征明 at 2016-09-26 10:27:07
谢谢...

不客气。根据你给的信息:90KD处的蛋白具有活性，而30KD是解聚后的亚基不具有生物活性(WB结果)。你可以试着跑一下非变性蛋白凝胶电泳，90KD的蛋白会是主带。

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15楼2016-09-26 12:03:36
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枝山征明

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 沉默、颜泪 at 2016-09-26 12:03:36
不客气。根据你给的信息:90KD处的蛋白具有活性，而30KD是解聚后的亚基不具有生物活性(WB结果)。你可以试着跑一下非变性蛋白凝胶电泳，90KD的蛋白会是主带。
...

十分感谢！
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16楼2016-09-27 10:12:12
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 沉默、颜泪 at 2016-09-25 08:44:05
很可能是三聚体，蛋白质的分子量刚好是3倍。并且，即使形成三聚体，30KD也该有蛋白印迹(主带)，90KD次带。

SDS不是把蛋白都打开了吗，为什么会有多聚体
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17楼2016-09-27 13:25:25
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沉默、颜泪

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 一个不小心就 at 2016-09-27 13:25:25
SDS不是把蛋白都打开了吗，为什么会有多聚体...

不敢说都打开。影响解聚和聚合的原因很多。我以前做PCT的WB鉴定。His标签表达的PCT，WB和变性电泳皆出现两条带。  与楼主不同的是，我的蛋白即使聚合成二聚体，也具有特异的蛋白印迹反应。

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18楼2016-09-27 13:35:38
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网海一粟

铁杆木虫 (著名写手)
你跑的是非还原性sdspage吧？跑一下还原性的试试呢

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19楼2016-09-28 06:48:40
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