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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » ppic9k载体电转毕赤酵母GS115，甲醇诱导外源表达
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erasedasd

新虫 (初入文坛)

[交流] ppic9k载体电转毕赤酵母GS115，甲醇诱导外源表达 已有3人参与

如题，经PCR检测载体已经转进去了，诱导表达有一个问题就是野生、空载没有目的条带，带目的基因的有条带，但是长度不对。而且差了很多，我的应该是45KD左右，但跑出来有70多KD。有没有朋友遇见过这种情况？
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1楼 2016-09-21 12:30:16
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erasedasd

新虫 (初入文坛)
ppic9k载体电转毕赤酵母GS115，甲醇诱导外源表达

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2楼2016-09-22 00:04:19
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547star

木虫 (著名写手)
★
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很多蛋白在毕赤酵母表达会进行糖基化，糖基化后的大小会比非糖基化的理论大小大很多。论坛里有很多类似你这样问题的帖子了。
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为什么
3楼2016-09-22 00:11:16
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erasedasd

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 547star at 2016-09-22 00:11:16
很多蛋白在毕赤酵母表达会进行糖基化，糖基化后的大小会比非糖基化的理论大小大很多。论坛里有很多类似你这样问题的帖子了。

我用糖基化预测的软件预测过，并没有特别的糖基化位点啊。

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4楼2016-09-22 07:22:42
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erasedasd

新虫 (初入文坛)
有没有可能是胞内表达没分泌出来？？？

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5楼2016-09-22 09:22:16
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烟雨莫问

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酵母表达存在翻译后修饰，建议用WB检测

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6楼2016-09-22 10:09:01
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erasedasd

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 烟雨莫问 at 2016-09-22 10:09:01
酵母表达存在翻译后修饰，建议用WB检测

分子构建忘了加tag，现在想起来蠢哭了…

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7楼2016-09-22 12:29:29
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547star

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by erasedasd at 2016-09-22 07:22:42
我用糖基化预测的软件预测过，并没有特别的糖基化位点啊。
...

这样的话，不知道你怎么得到开贴的结论的。另外，蛋白浓度有点低，不好比较，用三氯乙酸之类方法沉淀了再跑看看差别。
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为什么
8楼2016-09-23 00:18:25
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微微皮蛋

新虫 (初入文坛)
楼主，知道是什么了吗70的，我的也出现了，我的目的蛋白应该是62

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9楼2018-01-25 21:31:01
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