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怎样证明组织的核蛋白提取成功了？有什么好用的核蛋白提取试剂盒可以推荐啊~~~ 已有1人参与
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怎样证明组织的核蛋白提取成功了？有什么好用的核蛋白提取试剂盒可以推荐啊~~~ 我核内参用的LaminB1 同时也孵了GAPDH和Actin ， LaminB1 条带很浓 ，GAPDH的挺浅的 ，但是Actin的条带也很浓，所以我就很疑惑我的核蛋白到底有没有提取成功？求高手指教啊........提取成功的标准是什么？？ |
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sherrie0217
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【答案】应助回帖
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目前，市售的胞浆胞核蛋白提取分离试剂盒很难将胞浆蛋白和核蛋白分离干净，哪怕是他拿着一堆nature,science的参考文献跟你推销，所以，核蛋白中混入了一点胞浆蛋白是正常的（我提的也是这样的）。 LaminB1属于核膜蛋白，核纤层蛋白B1对于没有核被膜的样品是不适合作为内参的。一般情况下，核蛋白选用的内参是PCNA（29KD）、Histone H3（17KD）等(其实我看很多人也是用lamin来做核内参的）。验证是否真正将胞浆和核蛋白分开，可以如你那样跑核蛋白的同时孵育GAPDH，至于β-actin的带也很浓，因为其是细胞骨架蛋白，也存在于核内，作为染色质重塑复合物的一个组成部分(第一次我的核蛋白孵出来的β-actin也很浓，哈哈哈，当时心都碎了，换成GAPDH就好啦），GAPDH带很浅很浅就可以说明你提的核蛋白纯度是可以的，放心吧~加油~ |
2楼2017-07-17 20:06:48