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pl02544849

新虫 (初入文坛)

[交流] 将ETEC全长lacZ基因连接至PMD18-T载体,发现IPTG诱导与否均呈蓝色,是什么原因呢?

用ETEC基因组作为模版,克隆了全长的lacZ基因(lacZ基因仅包含ORF和上游的SD序列,不含有启动子),然后将这段lacZ基因连接到了PMD18-T载体上。这样的话这个新载体应该是受IPTG诱导的吧?但是实际做起来发现不论加不加IPTG,菌落均呈蓝色。之后进一步做了ONPG试验,结果诱导和不诱导的OD420nm结果差不多,有时候甚至不诱导的反而OD值更高。反复重复了挺多次,结果一直忽上忽下不稳定,我也是新手,现在有些弄不明白,查了一些文献,操作步骤也没什么问题啊,想请教一下大家,谢谢啦。
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