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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有关引物的几个小白问题，希望有人帮我解答
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wtqsz007

禁虫 (初入文坛)
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biostar2009

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1楼 2016-09-14 21:39:13
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sea4on

新虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-10-26 22:09:46
1.pcr扩增退火时，引物会和模板结合，在聚合酶的作用下延伸就可能扩增目的片段了。
2.引物设计不是改变碱基序列，而是去选择一段可行的碱基序列来扩增目的片段。比如退火温度，二级结构等等方面。
3. 可以根据序列设计兼并引物进行扩增，或者可以pcr扩增之后连接T载体啊。
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4楼2016-09-15 23:39:14
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p53jun

铁虫 (小有名气)
★
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引物类似于一个向导、一个起点。
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5楼2016-09-16 21:12:48
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love_l_l

禁言 (著名写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-26 22:10:04
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7楼2016-09-18 09:22:51
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Freda_0829

新虫 (初入文坛)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-26 22:10:22
DNA聚合酶只能延长基因片段不能合成，所以必须要一段引物先与模板结合。引物不止包括配对部分，还有你需要的酶切位点，保护碱基等。pcr阔增的时候配对部分当然要和模板严格配对，所谓设计引物是指调节配对区长度以达到合适TM值，并且适当插入碱基防止移码等。如果是测序，那目的片段连在载体上，可以从载体上选择配对区。

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8楼2016-09-18 13:30:10
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
送红花一朵
中秋快乐！
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2楼2016-09-15 19:50:02
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yuying0421

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-26 22:10:45
引物的作用是把目标片段的一部分截出来，或者是与目标片段紧密连锁的一段，目的是检测目标片段是否存在，一般可以从别人的文章中找到一些。

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3楼2016-09-15 20:27:25
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kshdd

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议你仔细看看PCR的过程

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6楼2016-09-17 23:13:06
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周义杰

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
8楼: Originally posted by Freda_0829 at 2016-09-18 13:30:10
DNA聚合酶只能延长基因片段不能合成，所以必须要一段引物先与模板结合。引物不止包括配对部分，还有你需要的酶切位点，保护碱基等。pcr阔增的时候配对部分当然要和模板严格配对，所谓设计引物是指调节配对区长度以达 ...

谢谢，讲得很清楚了

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9楼2016-09-18 19:30:52
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李菇凉

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我和你有同样的困惑，要扩增野生型DNA，现在也是一头雾水。primer premier 5.0 也还不知道去哪里下载，本地blast也总是下载不了求解惑。
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10楼2016-10-26 20:15:24
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