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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » AKTA柱压问题
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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)

[求助] AKTA柱压问题 已有3人参与

请问有没有人知道：蛋白质纯化时，将柱子用0.1M NaOH再生，柱子下端打开，这时候为什么AKTA显示的压力老是超过设定值？？
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1楼 2016-09-13 16:08:35
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juzhixianwei

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
柱子被堵了？你把柱子拆了，看看系统本底压力如何？
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2楼2016-09-13 17:12:39
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种情况是柱子堵了或者AKT外接管子有些堵塞。上样样品不能太粘或存在固体，上样样品没有处理好可能是造成柱子堵塞原因。另外，外接管路的堵塞可以将管子拆下来超声一下。再就是缓冲液等会有盐类物质，为避免残留造成堵塞等，平时上样过柱完后，用纯水将AKT管路清洗一遍，可以设定5~10ml/min的流速清洗，清洗到电导为零。诚挚祝你顺利。
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3楼2016-09-14 10:33:08
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

还有就是你的胶的最大流速和耐压是确定的，你柱子再生的时候，流速不要太快。一定流速对应一定耐压，同一个柱子流速越快，耐压越高。我这边用的是软胶，AKT压力设定我用的时候一般是设定到0.5Mpa。你排除了堵塞后，流速放小试试。
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4楼2016-09-14 10:43:05
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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by juzhixianwei at 2016-09-13 17:12:39
柱子被堵了？你把柱子拆了，看看系统本底压力如何？

系统压力应该是正常的，以前很少有这样的情况，不知道是不是哪里堵住了。。。
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5楼2016-09-14 16:41:13
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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by walking dead at 2016-09-14 10:33:08
这种情况是柱子堵了或者AKT外接管子有些堵塞。上样样品不能太粘或存在固体，上样样品没有处理好可能是造成柱子堵塞原因。另外，外接管路的堵塞可以将管子拆下来超声一下。再就是缓冲液等会有盐类物质，为避免残留造 ...

目前系统压力应该是正常的，可能是柱子方面的问题。。。谢谢！！
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6楼2016-09-14 16:44:28
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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by walking dead at 2016-09-14 10:43:05
还有就是你的胶的最大流速和耐压是确定的，你柱子再生的时候，流速不要太快。一定流速对应一定耐压，同一个柱子流速越快，耐压越高。我这边用的是软胶，AKT压力设定我用的时候一般是设定到0.5Mpa。你排除了堵塞后， ...

因为一直都是用原来的流速进行纯化的，但是最近出现柱压的问题，可能是哪里堵住了。。。谢谢了！！！
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7楼2016-09-14 16:46:04
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)
换柱子，柱子赌了,换一个柱子立马好啦。

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8楼2016-09-17 20:14:00
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之里

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用NaOH重生，要比平时跑样品流速降低的
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9楼2016-09-18 08:14:28
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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 之里 at 2016-09-18 08:14:28
用NaOH重生，要比平时跑样品流速降低的

好的，谢谢！！！
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10楼2016-09-19 13:17:37
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