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lzb7758520铁杆木虫 (著名写手)
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求助：紫外分光光度法的问题
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我想测一种已知污染物的浓度，文献中采用紫外分光光度法，弱弱的问下，这是什么仪器啊？是不是可以测紫外光谱的那种呢？ [ Last edited by lzb7758520 on 2008-11-21 at 16:38 ] |
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jsys
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光度分析法 通常指比色分析法和分光光度分析法,都是利用物理对光的选择性吸收性质建立起来的分析方法.本章只介绍后者.分光光度法灵敏度高,可不经富集直接测定低至5×10-5%的微量组分.若用于滴定法终点的检测,比目视检测终点的灵敏度高,这种方法称为光度滴定.目前已用于酸碱,配位,沉淀以及氧化还原各类滴定中. 吸收光谱的产生：两个以上原子组成的物质分子，除了电子相对于原子核的运动外，还有原子核间的相对振动和分子作为整体绕着重心的转动。这些运动状态各自具有相应的能量，分别称为电子能量、振动能量和转动能量。这些运动状态的变化是不连续的，即能级间的能量差是量子化的。由于光子的能量决定于频率，也是量子化的，所以分子对光的吸收亦是量子化的，即分子选择吸收能量与其能级间隔相一致的光子，而不是对各种能量的光子普遍吸收，这就是分子对光的吸收具有选择性的原因。分子吸收光能后引起引起运动状态的变化称为跃迁，跃迁过程中所需的能量称为激发能。分子选择吸收光的同时，伴随着分子吸收光谱的产生。电子能级间的能量差较大，跃迁产生的吸收光谱位于可见－紫外光谱区，称为分子的电子光谱。振动能级间的跃迁产生的吸收光谱位于红外区，称为红外光谱。转动能级跃迁产生的吸收光谱位于远红外区，称为远红外光谱。此外，在激发时分子可能产生解离，解离碎片的动能是非量子化的。所以，观察到的分子的电子光谱是由若干条谱带所组成的。基于这个原因，分子的电子光谱又称为带状光谱。 光吸收基本定律 朗伯定律  1760) A=lg(I0/It)=k1b当入射光的l ,吸光物质的c 一定时,溶液的吸光度A与液层厚度b成正比. 比尔定律(1852) A=lg(I0/It)=k2c 当入射光的l ,液层厚度b 一定时,溶液的吸光度A与吸光物质的c成正比. 朗伯-比尔定律 A=lg(I0/It)=kbc 意义: 当一束平行单色光通过均匀、透明的吸光介质时，其吸光度与吸光质点的浓度和吸收层厚度的乘积成正比. 朗伯-比尔定律的适用条件：1.单色光，应选用lmax处或肩峰处测定；2. 吸光质点形式不变， 离解、络合、缔合会破坏线性关系, 应控制条件(酸度、浓度、介质等；3. 稀溶液，浓度增大，分子之间作用增强. 例1 邻二氮菲光度法测铁r(Fe)=1.0mg/L, b=2cm , A=0.38 计算e 、S 和 解： c(Fe)=1.0 mg/L=1.0×10-3/55.85 =1.8×10-5(mol•L-1) S=M/e =55.85/1.1×104=0.0051 (mg/cm2) 测量条件的选择 （一）入射光波长选择 通常选择显色溶液的最大波长的入射光作测量波长，能获得高的灵敏度。 （二）测量狭缝的选择 测定狭缝越窄，虽然得到的单色光的波长范围越窄，单色光越纯，分辨率越高。但是入射光强度也越弱，随之而来的是仪器噪音增大，于测量不利。不减少吸光度的最大狭缝宽度，是应选择的合适的狭缝宽度。 （三）控制适当的吸光度测量范围 为避免大的误差出现，必须设计好试样用量和其在测量过程中的稀释度。 （四）参比溶液的选择 参比溶液的选择应是视具体情况而定。通常 1.当试液、显色剂和所用的其它试剂在测定波长都无吸收时，可用纯溶剂作参比溶液； 2.当试液无吸收，而显色剂或其试剂在测定波长处有吸收时，可用不加试样的“试剂空白”作参比溶液； 3.若待测试液本身在测量波长处有吸收，而显色剂等无吸收，则采用不加显色剂的“试剂空白”作参比溶液。 4.如果显色剂和试液在测量波长处都有吸收，可将一分试样溶液加入适当的掩蔽剂，所得溶液作参比溶液。 1、显色反应与反应条件的选择 一、显色剂与显色反应 生色团：－N＝N－，－N＝O，AR- C=S, （共轭双键）πe 助色团－NH，－OH，－X （孤对电子）ne 有机显色剂:磺基水杨酸; 邻二氮菲; 丁二酮肟; PAR;双硫腙 显色反应的选择: 灵敏度高，一般ε>10 4; 选择性好; 显色剂在测定波长处无明显吸收, 对照性好, $ lmax> 60 nm; 反应生成的有色化合物组成恒定，稳定; 显色条件易于控制，重现性好. 二、测定中的干扰以及消除方法: 1.化学法,测Co2＋ 掩蔽法); 测Co2＋ 生成络合物性质不同); 测Fe3＋控制pH); 消除干扰，也可采取分离法。2. 物理法—选择适当的测定波长选择适当的参比溶液: 1. 仅络合物有吸收，溶剂作参比。 如 phen—Fe2+ 标准曲线 2.待测液也有吸收，被测液作参比。 如 测汽水中的 Fe 3. 显色剂或其他试剂也有吸收，空白溶液作参比 例:邻二氮菲光度法测Li2CO3中的 Fe， 参比溶液为不含Li2CO3样品的所有试剂。 4. 干扰组分与显色剂有反应,又无法掩蔽消除时： 1）掩蔽被测组分，再加入显色剂，作参比. 2）加入等量干扰组分到空白溶液中,作参比. 2、吸光光度法的应用 单一组分的测定 1. 金属离子: Fe-phen, Ni-丁二酮肟, Co-钴试剂 2. 磷的测定: DNA中含P～9.2%, RNA中含P～9.5%, 可得核酸量. 3. 蛋白质测定—溴甲酚绿、考马司亮蓝等 4. 氨基酸测定—茚三酮(紫色化合物) 5. 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+---- 6. 药物含量测定—比吸光系数定量；荷移光谱法测定. 7. 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。 我们常用的是可见紫外分光光度计，用以测量，就象HPLC的UV是一样的，除了不能分离只外，其它的和HPLC的外标完全相同的 [ Last edited by jsys on 2008-11-20 at 15:48 ] |
2楼2008-11-20 15:45:48
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lchn18
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就是楼上2为说的紫外--可见分光光度计（UV-VIS）,它不是测紫外光谱的，是利用物质对紫外光的吸收来侧定物质的量。通过氘灯发出的紫外光和钨灯发出的可见光，经过单色器后一分为二，一路通过物质对紫外光的吸收之后到达检测器得到信号，另一路没有通过样品而经过空气作为空白，到达检测器得到信号，这种称为准双光束分光光度计； 也有两路都分别通过样品、和参比到检测器得到信号，这种称为双光束分光光度计； 还有一种是只有一路光通过样品池到达检测器，这类称为单光束分光光度计。 [ Last edited by lchn18 on 2008-11-21 at 22:38 ] |
4楼2008-11-21 22:29:38
