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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » spec壮观霉素老是长杂菌
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avrchzx014

金虫 (小有名气)
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spec壮观霉素老是长杂菌
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我在构建载体，抗性是spec壮观霉素，配成平板，用DH5α感受态，转化质粒，老是平板上厚厚一层菌，不是一个个克隆，是一层菌，怎么回事。我换了几家公司，索来宝，生工都这样。有没有人遇到同样的问题，spec我用水配的。

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1楼 2016-09-09 10:33:48
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avrchzx014

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by aliaaxmu2016 at 2016-09-09 10:45:39
让你不长那么密，你均匀涂板总有机会长满全板，梯度涂板总有长得稀的
...

之前太厚了，你涂的太少杂菌少了，转化克隆也就少了啊，而且前提杂菌更多啊。所以你这个方法好像不靠谱

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12楼2016-09-09 10:49:06
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匿名


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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7楼2016-09-09 10:35:27
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aliaaxmu2016

金虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不要均匀涂板，一侧多涂，一侧不涂，中间过渡

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8楼2016-09-09 10:36:52
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avrchzx014

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 626333799 at 2016-09-09 10:35:27
spec是不是失效了

我换了好几家公司的抗生素，都是新买的。

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9楼2016-09-09 10:42:01
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avrchzx014

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by aliaaxmu2016 at 2016-09-09 10:36:52
不要均匀涂板，一侧多涂，一侧不涂，中间过渡

不是很懂，你的目的是什么

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10楼2016-09-09 10:42:30
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aliaaxmu2016

金虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by avrchzx014 at 2016-09-09 10:42:30
不是很懂，你的目的是什么
...

让你不长那么密，你均匀涂板总有机会长满全板，梯度涂板总有长得稀的

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11楼2016-09-09 10:45:39
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avrchzx014

金虫 (小有名气)
我不知道是不是感受态的原因，难道dh5α自带壮观霉素抗性

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13楼2016-09-09 10:49:53
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aliaaxmu2016

金虫 (职业作家)
引用回帖:
12楼: Originally posted by avrchzx014 at 2016-09-09 10:49:06
之前太厚了，你涂的太少杂菌少了，转化克隆也就少了啊，而且前提杂菌更多啊。所以你这个方法好像不靠谱
...

你试试再说呗，你怎么知道那些密密麻麻的是杂菌呢？如果菌转的没问题，又排除实验低级错误，那么我想不到其它了

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14楼2016-09-09 10:52:48
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匿名


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15楼2016-09-09 10:55:16
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小忆海

新虫 (初入文坛)
★
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请问楼主问题解决了没，我也遇到相似情况

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16楼2016-11-15 16:01:57
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梦想天行

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
spec壮观霉素不太好用，建议从新构建质粒换抗性。

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17楼2016-11-15 22:37:41
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avrchzx014

金虫 (小有名气)
内容已删除
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18楼2016-11-17 23:05:22
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avrchzx014

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 小忆海 at 2016-11-15 16:01:57
请问楼主问题解决了没，我也遇到相似情况

没有解决

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19楼2016-11-17 23:06:44
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梦想天行

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by avrchzx014 at 2016-11-17 23:05:22
可是这个抗性我以前用了很久，都没有问题。现在这样，不知道哪里出问题了。换抗性不好办
...

spec壮观霉素不太好用，会出现抗性越来越强，建议从新构建质粒换抗性。经验之谈

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20楼2016-11-17 23:52:05
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一支糖

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主现在解决了吗？
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21楼2017-03-01 18:41:29
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182716731322楼
2016-09-09 10:33   回复  
avrchzx014(金币+1): 谢谢参与
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zhang_xh3楼
2016-09-09 10:33   回复  
avrchzx014(金币+1): 谢谢参与
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下箭头4楼
2016-09-09 10:33   回复  
avrchzx014(金币+1): 谢谢参与
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God_1195楼
2016-09-09 10:33   回复  
avrchzx014(金币+1): 谢谢参与
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寂地落雪06楼
2016-09-09 10:34   回复  
avrchzx014(金币+1): 谢谢参与
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