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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
37楼: Originally posted by 雾里看花花开 at 2016-09-05 07:24:49
我也打算重新做了
...

还有你的模板最好也确认一下

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41楼2016-09-05 12:31:48
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harry007

新虫 (小有名气)
为什么没有人表示35个循环太多了？一般25个足够了

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42楼2016-09-05 21:47:41
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hongbaojiang

新虫 (正式写手)
建议把起始温度调到94℃左右，然后用Taq master mix P一下试试

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43楼2016-09-05 22:01:19
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hongbaojiang

新虫 (正式写手)
引用回帖:
42楼: Originally posted by harry007 at 2016-09-05 21:47:41
为什么没有人表示35个循环太多了？一般25个足够了

35不多，

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44楼2016-09-05 22:02:02
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luckydog52

木虫 (著名写手)
第8道是模版吧? 感觉还是引物的问题, 再检查下是不是设计顺拐了?另外taq mix的话 55直接就够了, 没必要梯度。高保真就模板稀释100倍

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自信源于一次次成功的积累
45楼2016-09-05 22:43:02
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siyuansing

银虫 (小有名气)
是不是预变性和变性温度过高了？酶失活了？降低一下试试，另外再用其他品牌的酶试一下。再看看是不是引物出问题了。

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46楼2016-09-06 18:24:58
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腐草为萤8

金虫 (著名写手)

cat
50ul体系mix25ul就够了吧，剩下的高压水补齐

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实验，美食
47楼2016-09-06 18:29:53
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971731043

新虫 (职业作家)
酶加多了吧

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48楼2016-09-06 22:08:58
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houfuyuan

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个浓度的模板是可以的。你的预变性温度调到94度5min，变性温度94度30s。延伸时间调到2min。你的点样孔那么亮是什么？样品不纯吧。
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玉无瑕，青春无华。
49楼2016-09-07 20:10:00
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cheng910323

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

跟体系没关系，只需要把你的模板浓度稀释1000倍，就可以了

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不语
50楼2016-09-07 20:47:08
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