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Liumengya

木虫 (正式写手)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-04 13:11:58
个人感觉酶是最重要的，其次你的模板好像有点多

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21楼2016-09-03 23:48:31
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疯狂的菜鸟

木虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-04 13:12:05
你的模板都跑很远了，PCR产物却还在孔里，感觉跟基因组DNA一样，说明PCR操作有问题。你可以试着将模板稀释10倍以上，可以做个浓度梯度预实验；质粒的解链温度不需要那么高，94-95℃就可以了；退火温度看你做了梯度，你可以从45-65℃间隔5℃设置温度梯度。
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22楼2016-09-04 10:05:41
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雾里看花花开

金虫 (正式写手)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-04 13:12:10
在线急等！！！PCR大神！

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我的一生最美好的场景就是遇见你
23楼2016-09-04 11:59:14
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雾里看花花开

金虫 (正式写手)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-04 13:12:17
引用回帖:
23楼: Originally posted by 雾里看花花开 at 2016-09-04 11:59:14

这张图那两个没有弥散的是只加了之前一半的mix的量

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我的一生最美好的场景就是遇见你
24楼2016-09-04 12:00:52
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雾里看花花开

金虫 (正式写手)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-04 13:12:22
引用回帖:
22楼: Originally posted by 疯狂的菜鸟 at 2016-09-04 10:05:41
你的模板都跑很远了，PCR产物却还在孔里，感觉跟基因组DNA一样，说明PCR操作有问题。你可以试着将模板稀释10倍以上，可以做个浓度梯度预实验；质粒的解链温度不需要那么高，94-95℃就可以了；退火温度看你做了梯度， ...

好的

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我的一生最美好的场景就是遇见你
25楼2016-09-04 12:01:07
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-04 13:12:27
估计是你的目的片段太长了，交易分段PCR，模板浓度没有太大影响，换好用的扩增长片段的酶试试，不过可能没有改善

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26楼2016-09-04 12:11:04
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-04 13:12:32
退火温度可以在50到60之间选，像你这样的情况可以先试试低温

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27楼2016-09-04 12:14:16
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雾里看花花开

金虫 (正式写手)
引用回帖:
27楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2016-09-04 12:14:16
退火温度可以在50到60之间选，像你这样的情况可以先试试低温

温度我试了53，55，58，结果还是一样的

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我的一生最美好的场景就是遇见你
28楼2016-09-04 13:22:44
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
29楼2016-09-04 14:01:23
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onlyawaityou

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 千里两句 at 2016-09-03 17:29:12
你用的是什么mix，让大家看看，好给你做分析
...

其实用mix 很难分析，我觉得你还是各种分开加

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30楼2016-09-04 19:04:04
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