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包晓明

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by 千里两句 at 2016-09-03 18:23:00
透析后做的酶切吗？

对，两次透析用的不同的透析液，一次用的Tris-HCl，一次用的水，水的那次透析完的蛋白是有点乳白色的，不知道是不是变性了，变性会影响酶切吗
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11楼2016-09-03 18:26:12
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千里两句

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 包晓明 at 2016-09-03 18:26:12
对，两次透析用的不同的透析液，一次用的Tris-HCl，一次用的水，水的那次透析完的蛋白是有点乳白色的，不知道是不是变性了，变性会影响酶切吗...

不是很清楚诶，看你的描述，将透析过后的样品离心下，将pellet加上loading buffer处理后跑一下

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12楼2016-09-03 18:33:24
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千里两句

新虫 (小有名气)
如果有23左右的条带出来，那就只能说明水透析后，蛋白沉了

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13楼2016-09-03 18:34:40
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包晓明

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 千里两句 at 2016-09-03 18:33:24
不是很清楚诶，看你的描述，将透析过后的样品离心下，将pellet加上loading buffer处理后跑一下
...

融合蛋白是有的，但是用TEV酶切之后看不到我的目的条带（约3KDa）掉下来，不知道是我的胶的问题还是酶切的问题
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14楼2016-09-03 18:36:33
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千里两句

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 千里两句 at 2016-09-03 18:34:40
如果有23左右的条带出来，那就只能说明水透析后，蛋白沉了

不过你透析后的样品那条道23左右有你的目的蛋白，而且量也可以

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15楼2016-09-03 18:37:27
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千里两句

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 包晓明 at 2016-09-03 18:36:33
融合蛋白是有的，但是用TEV酶切之后看不到我的目的条带（约3KDa）掉下来，不知道是我的胶的问题还是酶切的问题...

感觉像是没有切动，不太像胶的问题

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16楼2016-09-03 18:40:02
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千里两句

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 包晓明 at 2016-09-03 18:36:33
融合蛋白是有的，但是用TEV酶切之后看不到我的目的条带（约3KDa）掉下来，不知道是我的胶的问题还是酶切的问题...

感觉像是没有切动，不太像胶的问题

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17楼2016-09-03 18:40:48
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千里两句

新虫 (小有名气)
再个你的TEV跟你的融合蛋白分子量太接近了

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18楼2016-09-03 18:42:15
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包晓明

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 千里两句 at 2016-09-03 18:37:27
不过你透析后的样品那条道23左右有你的目的蛋白，而且量也可以
...

我透析后的样品应该没有问题，就是纯化的蛋白有杂带，但是我的目的蛋白太小了，即使切下来我也不一定能跑出来，现在只能做一次western看看了，但是western不知道用什么胶
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19楼2016-09-03 18:43:06
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千里两句

新虫 (小有名气)
你也不好区分，我觉得你还是重新跑块胶，把参照带上会好比较分析

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20楼2016-09-03 18:43:39
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