应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助 麻烦点进来看看
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 734  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Hey Daring

新虫 (正式写手)

[求助] 求助 麻烦点进来看看 已有2人参与

需要做荧光定量验证 所以需要内参 但是这个物种之前没人做过分子方面的分析 做完转录组测序后 分析得出三个可能作为内参的序列 然后合成引物 看看是否能扩增出来 问题是 第一次PCR以后 有所需条带 第二次直到现在做的话 没有任何条带 换了引物也不行 过程中的操作很严格 试剂也没问题 求大神帮忙解答 假如自身没有序列可以作为内参(相近的种属也没类似研究) 如何找到可用内参 拜托

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-09-02 19:30:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-03 08:11:02
可以看看相关文献，一般都是用tublin、actin、18s rDNA、UBQ等常见管家基因，从你这个物种转录组里挑出相关基因，先扩全长序列，然后根据测序结果再设计定量引物。
赞一下 回复此楼
2楼2016-09-03 01:52:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

世间妙音

铁虫 (初入文坛)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-03 08:11:07
祝好运

发自小木虫Android客户端
回复此楼
千江有水千江月，万里无云万里天
3楼2016-09-03 06:29:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hey Daring

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-09-03 01:52:45
可以看看相关文献，一般都是用tublin、actin、18s rDNA、UBQ等常见管家基因，从你这个物种转录组里挑出相关基因，先扩全长序列，然后根据测序结果再设计定量引物。

之前挑出三个可以作为内参的后备序列，然后连接载体，摇菌送去测序，发现跟我的序列同源性很低，想再重复一次或者换引物试一次的时候就P不出来了。如果我用别的物种的内参，我是不是还需要验证下那个内参在我这是否存在或者可以稳定表达？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-09-04 10:54:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by Hey Daring at 2016-09-04 10:54:11
之前挑出三个可以作为内参的后备序列，然后连接载体，摇菌送去测序，发现跟我的序列同源性很低，想再重复一次或者换引物试一次的时候就P不出来了。如果我用别的物种的内参，我是不是还需要验证下那个内参在我这是否 ...

你连到载体上的序列与你序列相似性低，意思就是与你转录组里的序列比相似性低吧？那到底是不是你需要的目标序列呢？相似性是多少？如果是一个非特异扩增，那需要参考其他物种重新设计引物。如果确定是你的目标序列，那就根据你的测序结果重新设计引物。用别的物种内参是需要先验证是否存在和是否能稳定表达的。
赞一下 回复此楼
5楼2016-09-04 14:02:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hey Daring

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by stone2239 at 2016-09-04 14:02:00
你连到载体上的序列与你序列相似性低，意思就是与你转录组里的序列比相似性低吧？那到底是不是你需要的目标序列呢？相似性是多少？如果是一个非特异扩增，那需要参考其他物种重新设计引物。如果确定是你的目标序列 ...

嗯 送去测序以后 跟我可能作为内参的序列进行序列比对 相似性30％左右 如果我的物种自己的序列没有合适的 可以用作内参的话 我就需要使用别的物种 麻烦请教您 如何确定别的物种的内参在我这存在以及稳定表达

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-09-04 23:17:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

是否方便告知你研究的物种是什么啊？不应该没有内参基因吧？任何物种肯定有house-keeping基因的
赞一下 回复此楼
坚持到底就是胜利！
7楼2016-09-08 10:59:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hey Daring

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by kuaile5420 at 2016-09-08 10:59:43
是否方便告知你研究的物种是什么啊？不应该没有内参基因吧？任何物种肯定有house-keeping基因的

不好意思，之前帖子出现问题没及时回复，材料是植物，东方香蒲，确实没人做，不过内参现已找到，谢谢

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-02-13 00:25:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Hey Daring 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 08生物与医药专硕初试346找调剂 +6 dianeeee 2026-04-01 7/350 2026-04-02 08:23 by guoweigw
[考研] 279求调剂 +3 学而思兮知 2026-04-01 3/150 2026-04-01 23:28 by 欣喜777
[考研] 261求调剂 +3 明仔· 2026-04-01 3/150 2026-04-01 20:52 by cq2548
[考研] 350求调剂 +7 阿佳～ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 16:12 by yanflower7133
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +7 @taotao 2026-03-30 7/350 2026-04-01 14:30 by chenqifeng666
[考研] 求调剂 +4 DADA怪 2026-03-31 4/200 2026-04-01 14:30 by ZXlzxl0425
[考研] 318求调剂 +8 七忆77 2026-04-01 8/400 2026-04-01 10:37 by Jaylen.
[考博] 26申博 +4 加油冲啊！ 2026-03-26 4/200 2026-03-31 22:42 by greychen00
[考研] 352分-085602-一志愿985 +6 海纳百川Ly 2026-03-29 6/300 2026-03-31 21:06 by yuq
[考研] 求调剂 生物学 377分 +6 zzll03 2026-03-31 6/300 2026-03-31 17:33 by 唐沐儿
[考研] 求调剂 +9 akdhjs 2026-03-31 10/500 2026-03-31 17:14 by zhyzzh
[考研] 生医工0831调剂求推荐 +4 小熊睿睿_s 2026-03-27 6/300 2026-03-31 17:12 by 记事本2026
[考研] 一志愿中海洋320化学工程与技术学硕求调剂 +8 披星河 2026-03-30 8/400 2026-03-31 08:53 by lbsjt
[考研] 08工科求调剂286 +5 tgs_001 2026-03-28 5/250 2026-03-31 08:18 by 一只好果子?
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
[考研] 328求调剂 +8 嗯滴的基本都 2026-03-27 8/400 2026-03-30 17:20 by Wang200018
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
[考研] 295求调剂 +5 wei-5 2026-03-26 5/250 2026-03-30 08:34 by 探123
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭