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需要做荧光定量验证 所以需要内参 但是这个物种之前没人做过分子方面的分析 做完转录组测序后 分析得出三个可能作为内参的序列 然后合成引物 看看是否能扩增出来 问题是 第一次PCR以后 有所需条带 第二次直到现在做的话 没有任何条带 换了引物也不行 过程中的操作很严格 试剂也没问题 求大神帮忙解答 假如自身没有序列可以作为内参(相近的种属也没类似研究) 如何找到可用内参 拜托 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2016-09-03 01:52:45
3楼2016-09-03 06:29:32
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之前挑出三个可以作为内参的后备序列，然后连接载体，摇菌送去测序，发现跟我的序列同源性很低，想再重复一次或者换引物试一次的时候就P不出来了。如果我用别的物种的内参，我是不是还需要验证下那个内参在我这是否存在或者可以稳定表达？ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-09-04 10:54:11
5楼2016-09-04 14:02:00
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嗯 送去测序以后 跟我可能作为内参的序列进行序列比对 相似性30％左右 如果我的物种自己的序列没有合适的 可以用作内参的话 我就需要使用别的物种 麻烦请教您 如何确定别的物种的内参在我这存在以及稳定表达 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-09-04 23:17:08
7楼2016-09-08 10:59:43
8楼2017-02-13 00:25:13