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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 用多酚氧化酶作为抗原免疫小鼠，完全佐剂免疫后多久可以用不完全佐剂再次免疫？
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0220zy

新虫 (初入文坛)

[求助] 用多酚氧化酶作为抗原免疫小鼠，完全佐剂免疫后多久可以用不完全佐剂再次免疫？ 已有1人参与

用多酚氧化酶作为抗原免疫小鼠，完全佐剂免疫后多久可以用不完全佐剂再次免疫？
一般全程免疫时间是几周？

谢谢
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1楼 2016-09-02 16:35:05
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

了解一些。我是做scFv库的。小鼠做抗体多样性比较多。上下游引物也比较多。可能就有些引物对P不出东东来，要好好优化条件的。工作量还是比较大的。至于Fab库，我没有注意引物有多少。
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4楼2016-09-03 19:50:20
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的多酚氧化酶应该是纯化的蛋白。我实验室的经验是，间隔两周免疫一次。一般三次就可以满足后续实验要求了。即一次完全佐剂。加两次不完全佐剂。第三次免疫完后一周取血测抗体效价。如果符合要求，可以收集血清。但小鼠一般都是做单克隆的。可以再加强免疫一次，三天后，取脾脏做杂交瘤实验。
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2楼2016-09-02 23:33:09
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0220zy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-09-02 23:33:09
你用的多酚氧化酶应该是纯化的蛋白。我实验室的经验是，间隔两周免疫一次。一般三次就可以满足后续实验要求了。即一次完全佐剂。加两次不完全佐剂。第三次免疫完后一周取血测抗体效价。如果符合要求，可以收集血清。 ...

你好，我用的是从公司购买的酶，这周二8月30日用完全佐剂免疫了一次腹腔注射免疫，小鼠产生反应（全身颤抖，抱团取暖），3-4天后已经恢复正常。我导师让每次每只注射0.5ml，那我就按你说的隔一周免疫一次，第三次免疫后测一下效价，看看情况。
我用小鼠做的不是杂交瘤实验，是想先用小鼠来做一个噬菌体表达抗体实验的预实验，等血清效价满足要求后，取脾脏提RNA，反转录，然后用PCR扩增抗体FAB片段的基因，导入噬菌体进行表达。不知道你对这部分是否有了解？
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3楼2016-09-03 09:17:02
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0220zy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-09-03 19:50:20
了解一些。我是做scFv库的。小鼠做抗体多样性比较多。上下游引物也比较多。可能就有些引物对P不出东东来，要好好优化条件的。工作量还是比较大的。至于Fab库，我没有注意引物有多少。

大神  能稍微讲讲优化条件都是哪些方面么？
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5楼2016-09-05 19:30:09
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