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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 关于酶连 急！！
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sunmaocai

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助 关于酶连 急！！

我酶连22度过夜没有连起来，又试了加PEG22度1小时也没连起来
  哪位大侠有好的酶连方法，拜求！
  谢谢！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-26 at 18:56 ]
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1楼 2008-11-19 10:15:32
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longxiange520

金虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
一般是室温1小时或者4°过夜就可以连接好的，你的是平末端连接还是粘性末端连接？一般粘性末端比较好连点。酶方面好像T4连接酶效率比较高。
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2楼2008-11-19 10:51:34
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
1. T4连接酶通常16°C过夜；
2. DNA与载体片段是否酶切完全? 二者的比例（通常1：3-10）与浓度是否合适？
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3楼2008-11-19 11:05:20
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):3Q~
难连的建议使用快速连接kit
最近试用了TOYOBO的ligation high ver.2
效果很不错
16度30min连得很完全
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4楼2008-11-19 18:45:52
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by qgaoamtf at 2008-11-19 11:05:
1. T4连接酶通常16°C过夜；
2. DNA与载体片段是否酶切完全? 二者的比例（通常1：3-10）与浓度是否合适？

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不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
5楼2008-11-20 14:31:58
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loveedward

银虫 (小有名气)
是不是你的连接体系有问题啊？
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6楼2008-12-14 22:33:31
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