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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白质组学实验的多肽酶解物要过10K滤膜吗？
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jiafeijiafei

金虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质组学实验的多肽酶解物要过10K滤膜吗？

我最近在做蛋白质质谱，提取的蛋白跑SDS-PAGE，银染脱色，还原烷化，酶解，提取酶解物，冻干，复溶进质谱。我看有的文献说在提取酶解物之后冻干之前要进10K滤膜。不知道过10K滤膜的作用和意义是什么，过滤膜之后多肽不会有损失吗？哪个牌子的好用一些呢？
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1楼 2016-08-30 12:39:05
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xiaofuss111

新虫 (著名写手)
★
jiafeijiafei(金币+1): 谢谢参与
非常好

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5楼2016-08-31 08:14:55
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DECHIBIO

金虫 (著名写手)
★
jiafeijiafei(金币+1): 谢谢参与
10K滤膜表示分子量大小小的；你是希望把多大分子量多肽过滤掉的
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6楼2016-08-31 10:16:44
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jiafeijiafei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by DECHIBIO at 2016-08-31 10:16:44
10K滤膜表示分子量大小小的；你是希望把多大分子量多肽过滤掉的

我不滤掉的，我的操作是酶解提取酶解液，我的想法是可以滤掉凝胶残渣，这样滤过液直接冻干成干粉再复溶就进液相做质谱了。我这个思路对吗？
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7楼2016-08-31 11:10:25
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王老吉2016

铁虫 (初入文坛)
★
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这需要根据你的方案来制定的，你需要搜集的肽片段在多少的，你就选择多大的微孔滤膜，跑2-DE应该不会选择10K滤膜了。
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8楼2016-09-05 13:21:52
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protemics

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
超滤主要是脱盐，去除尿素以及其他可能干扰酶活性的小分子

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9楼2016-09-05 15:42:07
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jiafeijiafei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 王老吉2016 at 2016-09-05 13:21:52
这需要根据你的方案来制定的，你需要搜集的肽片段在多少的，你就选择多大的微孔滤膜，跑2-DE应该不会选择10K滤膜了。

我是跑1D的PAGE胶，切胶 脱色 还原烷化 酶解，酶解后直接吸取酶解液冻干的，然后干粉复溶就进质谱的，可是我的难题就是怎么去除SDS，还有吸取酶解液之后需不需要其他处理再冻干啊

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10楼2016-09-05 20:48:22
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jiafeijiafei

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by protemics at 2016-09-05 15:42:07
超滤主要是脱盐，去除尿素以及其他可能干扰酶活性的小分子

我是跑SDS PAGE胶，银染 切胶 脱色 还原烷化 酶解，酶解后直接吸取酶解液冻干的，然后干粉复溶就进质谱的，可是我的难题就是怎么去除SDS，还有吸取酶解液之后需不需要其他处理再冻干啊

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11楼2016-09-05 20:49:14
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bwang377

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
多肽分子量较小，一般在10kDa以下~
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12楼2016-09-06 15:37:36
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dsctg2楼
2016-08-30 12:50   回复  
jiafeijiafei(金币+1): 谢谢参与
syhorchid3楼
2016-08-30 13:26   回复  
jiafeijiafei(金币+1): 谢谢参与
slytjiaofei4楼
2016-08-31 07:21   回复  
jiafeijiafei(金币+1): 谢谢参与
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