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jiafeijiafei

金虫 (小有名气)


[交流] 蛋白质组学实验的多肽酶解物要过10K滤膜吗?

我最近在做蛋白质质谱,提取的蛋白跑SDS-PAGE,银染脱色,还原烷化,酶解,提取酶解物,冻干,复溶进质谱。我看有的文献说在提取酶解物之后冻干之前要进10K滤膜。不知道过10K滤膜的作用和意义是什么,过滤膜之后多肽不会有损失吗?哪个牌子的好用一些呢?
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xiaofuss111

新虫 (著名写手)



jiafeijiafei(金币+1): 谢谢参与
5楼2016-08-31 08:14:55
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DECHIBIO

金虫 (著名写手)



jiafeijiafei(金币+1): 谢谢参与
10K滤膜表示分子量大小小的;你是希望把多大分子量多肽过滤掉的
6楼2016-08-31 10:16:44
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jiafeijiafei

金虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by DECHIBIO at 2016-08-31 10:16:44
10K滤膜表示分子量大小小的;你是希望把多大分子量多肽过滤掉的

我不滤掉的,我的操作是酶解提取酶解液,我的想法是可以滤掉凝胶残渣,这样滤过液直接冻干成干粉再复溶就进液相做质谱了。我这个思路对吗?
7楼2016-08-31 11:10:25
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王老吉2016

铁虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这需要根据你的方案来制定的,你需要搜集的肽片段在多少的,你就选择多大的微孔滤膜,跑2-DE应该不会选择10K滤膜了。
8楼2016-09-05 13:21:52
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protemics

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
超滤主要是脱盐,去除尿素以及其他可能干扰酶活性的小分子

发自小木虫Android客户端
9楼2016-09-05 15:42:07
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jiafeijiafei

金虫 (小有名气)


引用回帖:
8楼: Originally posted by 王老吉2016 at 2016-09-05 13:21:52
这需要根据你的方案来制定的,你需要搜集的肽片段在多少的,你就选择多大的微孔滤膜,跑2-DE应该不会选择10K滤膜了。

我是跑1D的PAGE胶,切胶 脱色 还原烷化 酶解,酶解后直接吸取酶解液冻干的,然后干粉复溶就进质谱的,可是我的难题就是怎么去除SDS,还有吸取酶解液之后需不需要其他处理再冻干啊

发自小木虫Android客户端
10楼2016-09-05 20:48:22
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jiafeijiafei

金虫 (小有名气)


引用回帖:
9楼: Originally posted by protemics at 2016-09-05 15:42:07
超滤主要是脱盐,去除尿素以及其他可能干扰酶活性的小分子

我是跑SDS PAGE胶,银染 切胶 脱色 还原烷化 酶解,酶解后直接吸取酶解液冻干的,然后干粉复溶就进质谱的,可是我的难题就是怎么去除SDS,还有吸取酶解液之后需不需要其他处理再冻干啊

发自小木虫Android客户端
11楼2016-09-05 20:49:14
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bwang377

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
多肽分子量较小,一般在10kDa以下~
12楼2016-09-06 15:37:36
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dsctg2楼
2016-08-30 12:50   回复  
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syhorchid3楼
2016-08-30 13:26   回复  
jiafeijiafei(金币+1): 谢谢参与
2016-08-31 07:21   回复  
jiafeijiafei(金币+1): 谢谢参与
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