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in vivo crosslink蛋白交联
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看到有很多文献用戊二醛处理蛋白样品,然后跑SDS-PAGE再做blot，用特异性抗体标识同源二聚体或三聚体、四聚体的蛋白。我有几个问题想问，希望战友们帮我解疑 ： 1、如果我要做的蛋白同时存在四聚体和二聚体，可以同时标识出来两种多聚体的量么； 2、细胞或者组织用含有NP-40的蛋白裂解液提取的蛋白样品，能直接加入0.005%-0.1%的戊二醛进行交联么？我看有些方法说用PBS配制的戊二醛进行交联，难道是说细胞和组织蛋白不要用Lysis buffer提取，直接用PBS收集蛋白么？ 3、如果已经加了SDS和巯基乙醇配制的loadingBuffer的蛋白样品，可以再加入戊二醛进行蛋白的交联么？我觉得SDS和巯基乙醇应该会破坏蛋白的二级结构，那么交联过后的蛋白样品是否改变Loading buffer的配制方法？ 除了使用戊二醛，还有别的更好的方法进行同源二聚体量的检测么？ 比如DMS, DMA，但是没有具体的操作步骤，请大家多多帮助！ |
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2楼2016-08-30 14:00:08
pursuream
至尊木虫 (正式写手)
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发个广告喽，虽然可能帮不到你。 基于非天然氨基酸的光交联，还有另外几篇文章： Lin S, He D, Long T, Zhang S, Meng R, Chen P*, "Genetically Encoded Cleavable Protein Photocrosslinker", J. Am. Chem. Soc. (2014), 136, 11860-3. Zhang M, Lin S, Song X, Liu J, Fu Y, Fu X, Chang Z*, and Chen P*. “A genetically incorporated crosslinker reveals chaperone cooperation in acid resistance”, Nat. Chem. Biol. (2011), 7, 671-7. |
3楼2016-08-31 15:02:46