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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 漆酶基因
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Forest666

铜虫 (初入文坛)

[求助] 漆酶基因 已有2人参与

求共享漆酶（laccase）基因，最近一直在钓这个基因，就是钓不出来。
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ATGC
1楼 2016-08-27 19:55:14
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-28 08:27:01
从什么物种里钓？

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2楼2016-08-28 00:44:40
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Forest666

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-28 00:44:40
从什么物种里钓？

白腐真菌
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ATGC
3楼2016-08-28 13:26:52
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Forest666 at 2016-08-28 13:26:52
白腐真菌

你是用什么方法钓基因？数据库里有很多白腐菌漆酶的mRNA和基因组序列，都不能用吗？
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4楼2016-08-28 14:51:05
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Forest666

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-28 14:51:05
你是用什么方法钓基因？数据库里有很多白腐菌漆酶的mRNA和基因组序列，都不能用吗？...

提RNA，反转录。提了RNA之后,反转录，之后PCR，没有结果
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ATGC
5楼2016-08-29 16:49:33
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提取的RNA质量如何，确定可用吗？引物是够合适，PCR体系程序如何，影响因素有很多。
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6楼2016-08-29 18:12:51
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likelich

木虫 (小有名气)
反转录用的什么引物 随机还是oligo T

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7楼2016-08-30 08:55:46
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Forest666

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by likelich at 2016-08-30 08:55:46
反转录用的什么引物 随机还是oligo T

oligo T
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ATGC
8楼2016-08-30 19:30:56
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likelich

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by Forest666 at 2016-08-30 19:30:56
oligo T...

可以试试随机引物 另外可以调整一下退火温度 另外PCR可以试试保守区域 不行的话考虑兼并引物 兼并碱基控制在两个以内 PCR一定要做阳性对照

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9楼2016-08-31 14:48:09
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likelich

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by likelich at 2016-08-31 14:48:09
可以试试随机引物 另外可以调整一下退火温度 另外PCR可以试试保守区域 不行的话考虑兼并引物 兼并碱基控制在两个以内 PCR一定要做阳性对照
...

如果阳性有结果考虑引物的问题 否则先优化PCR条件

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10楼2016-08-31 14:49:26
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