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流式细胞凋亡检测问答
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1. Q:要做胃粘膜组织的DNA含量及倍体检查,但取材后要等几个星期才会做流式细胞术检查,请问:胃组织要怎样保存好呢?用低温保存,还是用乙醇固定?或者固定后再低温下保存? A:我做过乳腺细胞的DNA含量测定,取得组织以后,先处理成单细胞悬液,然后再加70%冰乙醇固定,要保证冰乙醇的最终浓度为50%,这样固定的细胞悬液可以至少保存12小时,最多可保存一个月,上机检测前再加PI综合染液。我就是这样做的,保存了将近三个星期,结果还可以,变异系数为5%. 2. 实验中想用PI分析细胞周期及凋亡率,请教几个问题: Q:(1)所用的RNAs酶用什么配制呢?用PBS配吗? A:RNaseA用PBS配制没有问题,但是注意要沸水浴去除DNase的活性。 Q:(2)测细胞周期和凋亡率时都要用RNAs酶,可以一起检测吗? A:用流式细胞仪测定时细胞周期和凋亡率是同时测定的,不用担心。 Q:(3)TritonX-100是固定剂吧,用了70%的冷乙醇(是4℃吗?),是不是就不用Triton X-100固定了? A:Triton X-100是起透化作用的,不是固定剂,可以用75%的乙醇于-20度固定。 Q:(4)还要设什么内参标准(5%鸡红细胞)吗? A:对照肯定是需要的,这个根据自己的需要进行设置。 Q:(5)不用试剂盒行不行啊? A:完全可以不用试剂盒。 哈哈 自问自答舍我其谁 |
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