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流式细胞凋亡检测问答
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1. Q：要做胃粘膜组织的DNA含量及倍体检查，但取材后要等几个星期才会做流式细胞术检查，请问：胃组织要怎样保存好呢？用低温保存，还是用乙醇固定？或者固定后再低温下保存？ A：我做过乳腺细胞的DNA含量测定，取得组织以后，先处理成单细胞悬液，然后再加70%冰乙醇固定，要保证冰乙醇的最终浓度为50%，这样固定的细胞悬液可以至少保存12小时，最多可保存一个月，上机检测前再加PI综合染液。我就是这样做的，保存了将近三个星期，结果还可以，变异系数为5%. 2. 实验中想用PI分析细胞周期及凋亡率，请教几个问题： Q：（1）所用的RNAs酶用什么配制呢？用PBS配吗？ A：RNaseA用PBS配制没有问题，但是注意要沸水浴去除DNase的活性。 Q：（2）测细胞周期和凋亡率时都要用RNAs酶，可以一起检测吗？ A：用流式细胞仪测定时细胞周期和凋亡率是同时测定的，不用担心。 Q：（3）TritonX-100是固定剂吧，用了70%的冷乙醇（是4℃吗？），是不是就不用Triton X-100固定了？ A：Triton X-100是起透化作用的，不是固定剂，可以用75%的乙醇于-20度固定。 Q：（4）还要设什么内参标准（5%鸡红细胞）吗？ A：对照肯定是需要的，这个根据自己的需要进行设置。 Q：（5）不用试剂盒行不行啊？ A：完全可以不用试剂盒。 哈哈 自问自答舍我其谁  |
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