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[求助]
求助胃癌细胞MKN45的脂质体转染和电穿孔转染的最优条件
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本人最近一直在做MKN45的转染，电转和脂质体转染都不成功，质粒大小9kb，电转用质粒浓度在1000-1800之前，脂质体转染用的质粒浓度在500-1000之间，还是转不进去，请求指导。。。 1. 脂质体转染 我用的lipo2000转染的，六孔板每孔接70万个细胞，第二天汇合度达80%开始转染，lipo加8μl，质粒分别加了2、4、6、8、10、12μg，转染前饥饿处理2小时，转染6小时后换液，还是一点荧光看不到。。。 2. 电穿孔法转染 细胞用量在300万左右，质粒加10μg，按照说明书预设的条件试了下225-300V的电压，脉冲时间0.5-2.5ms也都尝试了，仍然没有荧光。细胞死的也比较多，一点规律都没有，有的电压小的细胞死的更多。。。还有我的电阻不知为何很大（说明书要求30-60欧姆，我的有时能达到100欧姆。。。）。还有个别细胞在转染24小时后有一两个发荧光的细胞，但是之后再观察荧光就没有了，反倒有好多死细胞或者杂志发出的很暗的荧光，求解释啊。。。 做了一假期转染了，都不成功，求做过的大神们给指点指点啊！谢谢谢谢~ |
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