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青草悠悠1234

铁虫 (小有名气)

[求助] 高效液相色谱分析 已有1人参与

各位前辈们:你们好,我第一次做多肽蛋白质标品时,出峰时间16分钟,第二次在同样条件做,出峰时间5分钟,俩次分析之间做过人参皂甙的分析,本人猜想是柱子没冲干净,用纯甲醇冲洗是出现以下图,原因是什么?
多肽分析条件:  A   水+0.1%TFA    B  乙腈+0.1%TFA
时间       0           5                20
A          80          80              30
B        20            20              70

高效液相色谱分析
P60825-164949.jpg
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w9412

新虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 青草悠悠1234 at 2016-08-31 15:09:49
俩次进样相差应该有二十多天了吧,样品不会有问题,因为都是标品重配的,进样器会有什么问题?和柱子有关吗?请您多多指教!谢谢!...

如果排除样品问题,没出峰,我只能怀疑样品没进到柱子上去,所以才造成这个现象。还是建议你重复做一两次,梯度没必要优化么?可以的话,可以尝试一下。

如果梯度可以更改的话:
先30min内B相比例从5%走到90%,并在90%保持10分钟,然后根据出峰时间调整成缓一点的梯度。其实我是怀疑你第一次做的时候柱子没适应这个样品,然后第二次进样之后会出现出峰延后。
液相,分析纯化,多肽蛋白
11楼2016-09-01 15:08:13
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2350

新虫 (正式写手)

个人意见,看看压力波动大不大,感觉图谱很像呢!

发自小木虫Android客户端
2楼2016-08-26 13:48:12
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w9412

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这哪里是峰啊,没有峰好吧,是不是只采集了压力?
液相,分析纯化,多肽蛋白
3楼2016-08-26 15:00:34
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青草悠悠1234

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by w9412 at 2016-08-26 15:00:34
这哪里是峰啊,没有峰好吧,是不是只采集了压力?

嗯嗯,这是平衡的时候出现的情况,之前做一多肽时16分钟出峰,第二次条件相同,感觉不出峰,俩次测量条件相同,不知是什么原因造成的,请多多指教!图如下
高效液相色谱分析-1
P60830-135654.jpg

4楼2016-08-31 09:35:07
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