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免疫电泳实验
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一、基本原理 免疫电泳法是将凝胶电泳与双向免疫扩散两种技术相结合的一种实验方法。在电场作用下标本中各组分因电泳迁移率不同而分成区带，然后沿电泳平行方向将凝胶挖一沟槽，将抗体加入沟槽内，使抗原与抗体相互扩散而形成沉淀线。根据沉淀线的数量、位置及形状，分析标本中所含各组分的性质，本实验常用于抗原分析及免疫性疾病的诊断。 二、实验材料 1%离子琼脂（pH8.6巴比妥缓冲液加入等量蒸馏水，再加入1%琼脂。溶解后用脱脂棉过滤，分装，实验前加热溶解置56℃-60℃水浴箱中平衡温度备用）。免疫电泳用玻片待检血清人IgG(1mg/ml) 抗人全血清抗体（购自北京中山公司） 微量加样器及塑料吸头 尖吸管及橡皮吸头 打孔器、解剖刀、尺、打孔模板、湿盒等。 电泳仪：将pH8.6巴比妥缓冲液注入电泳槽内（注意正负极各槽内所加入的量应在同一水平）。并将滤纸裁至适当长度和宽度以备搭桥使用。 三、实验方法 1．将溶化的1%离子琼脂倾注于玻片上制成琼脂板。 2．琼脂板冷却凝固后，按照模板于挖槽线上下两侧各打一个孔，并分别用微量加样器加入待检血清及人IgG各15ul。 3．将琼脂板置于电泳槽内，注意电泳标本应放负极“―”一侧。并将已浸透缓冲液的滤纸一端覆盖于琼脂板两侧各约0.5cm,另一端浸于电泳液中。 4．接通电源，电压、电流及电泳时间应视仪器性能而定。一般电势梯度6 V/cm，电流每板20mA，泳动时间1-2小时。 5．电泳完毕，关闭电源，取出琼脂板，按模板位置用解剖力挖横槽。用特制尖吸管加入抗人全血清抗体。 6．将琼脂板置于湿盒中，于37℃温箱中扩散24小时。 四、实验结果 根据沉淀弧的位置及形状，参照免疫球蛋白迁移范围示意图，识别主要Ig。 |
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